胡麻种子发育和脂肪酸代谢相关microRNAs的鉴定和功能分析

目录

声明

摘要

主要符号对照表

第一章绪论

1．1植物脂肪酸

1．1．1植物脂肪酸的种类

1．1．2植物脂肪酸的功能

1．1．3植物脂肪酸的生物合成

1．1．4食用油中的脂肪酸组成

1．1．5油料作物中油脂相关的基因

1．2．1 miRNA的生物合成

1．2．2植物miRNA的作用机制

1．2．3植物miRNA的研究方法

1．2．4植物miRNA在种子发育与脂肪酸合成中的作用

1．3胡麻简介

1．3．1胡麻籽的脂肪酸组成和功能

1．3．2胡麻转录组的研究

1．3．3胡麻miRNA研究进展

1．3．4胡麻种子中油脂合成积累规律的研究

1．3．5胡麻脂肪酸合成相关基因的研究

1．4胡麻转基因技术

1．5本研究的目的意义

1．6本研究的技术路线

第二章胡麻种子发育过程中miRNAs的鉴定

2．1实验材料

2．2实验方法

2．2．1种子含油率测定

2．2．2RNA提取

2．2．3小RNA文库构建

2．2．4小RNA文库测序结果分析

2．2．5 miRNAs的表达量分析

2．2．6 miRNAs差异表达分析

2．2．7 qPCR对差异表达miRNAs进行验证

2．2．8 miRNA靶基因预测

2．2．9 miRNA的靶基因GO分析

2．2．10 miRNA靶基因裂解位点验证

2．3实验结果

2．3．1不同时期种子含油率的测定

2．3．2小RNA文库数据初步分析

2．3．3已知和新的miRNA鉴定

2．3．4 miRNA的表达与荧光定量验证

2．3．5 miRNAs靶基因预测及GO分析

2．3．6 miRNAs靶基因验证

2．3．7黑亚14号miRNA文库分析

2．4讨论

第三章胡麻miR156a的功能分析

3．1实验材料

3．1．1材料与种植

3．1．2质粒载体与菌株

3．2实验方法

3．2．1 DNA提取方法

3．2．2构建表达载体

3．2．3拟南芥的转化

3．2．4转基因拟南芥株高、叶片和开花期的统计

3．2．5种子脂肪酸组分和含油量测定

3．2．6过表达转基因株系基因表达量检测

3．3实验结果

3．3．1过表达载体的构建

3．3．2过表达miR156a株系的莲座叶变化

3．3．3过表达miR156a株系的开花期统计

3．3．4过表达miR156a株系的种子含油量变化

3．3．5过表达miR156a株系的靶基因和油品相关基因的表达模式分析

3．4讨论

第四章胡麻miR397b的功能分析

4．1实验材料

4．1．1材料与种植

4．1．2质粒载体与菌株

4．2实验方法

4．2．1 DNA提取方法

4．2．2构建表达载体

4．2．3拟南芥的转化

4．2．4转基因拟南芥株高和叶片的统计

4．2．5种子含油量测定

4．2．6过表达转基因株系基因表达量分析

4．3实验结果

4．3．1过表达载体的构建

4．3．2过表达miR397b株系的株高变化

4．3．3过表达miR397b株系的莲座叶变化

4．3．4过表达miR397b株系的种子含油量变化

4．3．5过表达miR397b株系的基因表达量变化

4．4讨论

第五章胡麻遗传转化体系的建立

5．1实验材料

5．1．1植物材料

5．1．2实验仪器

5．1．3实验所用的表达载体

5．2实验方法

5．2．1种子消毒及无菌苗的培养

5．2．2侵染转化与共培养

5．2．3恢复培养

5．2．4诱导培养

5．2．5伸长培养

5．2．6生根培养

5．2．7再生苗移栽

5．2．8阳性苗的鉴定

5．3实验结果

5．3．1次氯酸钠消毒时间对种子的影响

5．3．2共培养天数对外植体的影响

5．3．3草铵膦筛选剂浓度的确定

5．3．5伸长培养基激素组合的确定

5．3．6生根培养基激素组合的确定

5．3．7阳性苗的鉴定

5．3．8农杆菌介导的胡麻遗传转化体系

5．4讨论

第六章结论

参考文献

附录

致谢

个人简历