对灰飞虱高毒力的新型Bt杀虫蛋白基因克隆及其活性研究

目录

声明

主要符号对照表

第一章 绪论

1.1 灰飞虱危害与防治

1.2 苏云金芽胞杆菌

1.2.1 Bt杀虫蛋白

1.2.2 Cry蛋白与三维结构

1.2.3 Bt蛋白成孔及杀虫机理

1.3 Bt蛋白与刺吸式口器害虫

1.3.1 Bt蛋白对刺吸式害虫的活性

1.3.2 Bt蛋白对刺吸式害虫的活性低的原因

1.4 转Bt基因作物Cry蛋白的食用安全性

1.4.1 Cry蛋白的热稳定性

1.4.2 Cry蛋白的消化稳定性

1.4.3 Cry蛋白的过敏原性

1.4.4 Cry蛋白的动物毒理学实验

1.5 Bt新基因的鉴定方法

1.5.1 DNA层面的Bt新基因鉴定

1.5.2 蛋白层面的Bt新基因鉴定

1.5.3 高通量测序水平的Bt新基因挖掘

1.6 本研究的立题依据与目的意义

1.6.1 立题依据

1.6.2 目的意义

第二章 对灰飞虱有活性的Bt菌株筛选与分析

2.1 实验材料

2.1.1 候选菌株

2.1.2 供试昆虫与饲料

2.1.3 培养基

2.1.4 酶与生化试剂

2.1.5 常用仪器与设备

2.1.6 常用试剂与溶液

2.2 实验方法

2.2.1 cry78-like序列的生物信息学分析

2.2.2 cry64-like序列的生物信息学分析

2.2.3 候选Bt菌株晶体蛋白的提取

2.2.4 候选Bt菌株晶体蛋白的生物活性测定

2.2.5 活性菌株蛋白处理与活性检测

2.2.6 活性菌株芽胞晶体形态观察

2.2.7 活性菌株基因组分析与杀虫基因注释

2.2.8 无活性菌株蛋白胰蛋白酶消化与生测

2.3 实验结果

2.3.1 cry78-like序列的生物信息学分析情况

2.3.2 cry64-like序列的生物信息学分析情况

2.3.3 候选Bt菌株晶体蛋白的提取与活性测定结果

2.3.4 活性菌株蛋白处理与活性成分确定结果

2.3.5 活性菌株芽胞晶体形态观察结果

2.3.6 活性菌株基因组分析与杀虫基因注释情况

2.3.7 无活性菌株蛋白胰蛋白酶消化的活性对比结果

2.4 讨论

2.5 小结

第三章 新型杀虫蛋白表达与特性研究

3.1 实验材料

3.1.1 菌株与质粒

3.1.2 供试昆虫与饲料

3.1.3 培养基与抗生素

3.1.4 酶与生化试剂

3.1.5 常用仪器与设备

3.1.6 常用试剂与溶液

3.1.7 消化实验相关试剂

3.2 实验方法

3.2.1 Bt基因组提取

3.2.2 cry78-like基因的克隆、表达与生测

3.2.3 新型杀虫基因gene6来源菌株特征分析

3.2.4 新型杀虫基因gene6分子特征分析

3.2.5 新型杀虫蛋白Cry78Ba1热稳定性分析

3.2.6 新型杀虫蛋白Cry78Ba1消化稳定性分析

3.2.7 新型杀虫蛋白Cry78Ba1过敏原蛋白及结构分析

3.3 实验结果

3.3.1 Bt基因组提取

3.3.2 cry78-like基因的克隆、表达与纯化

3.3.3 Cry78-like蛋白的生物活性测定

3.3.4 新型杀虫基因gene6来源菌株特征分析

3.3.5 新型杀虫基因gene6分子特征

3.3.6 新型杀虫蛋白Cry78Ba1热稳定性分析

3.3.7 新型杀虫蛋白Cry78Ba1消化稳定性分析

3.3.8 新型杀虫蛋白Cry78Ba1过敏原蛋白及结构分析

3.4 讨论

3.5 小结

第四章 结论

参考文献

致 谢

作者简历