DNAJA3和RNF5抑制口蹄疫病毒复制的机制

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英文缩略表

第一章 绪论

1.1口蹄疫病毒

1.1.1口蹄疫病毒的结构和功能

1.1.2 FMDV抑制天然免疫的研究进展

1.1.3 FMDV与宿主互作及其调控机制的研究进展

1.2热休克蛋白

1.2.1主要热休克蛋白家族及其在免疫调节中的作用

1.2.2 热休克蛋白在病毒方面的相关研究

1.3 E3泛素连接酶

1.3.1 E3泛素连接酶在RIG-I信号通路中的研究进展

1.3.2 E3泛素连接酶在抗病毒中的研究进展

1.3.3 E3泛素连接酶RNF5的研究进展

1.4本研究的目的和意义

第二章 DNAJA3与VP1互作抑制FMDV复制的机制研究

2.1 材料和方法

2.1.1 细胞与病毒

2.1.2 试剂和抗体

2.1.3 质粒构建

2.1.4 溶液的配制

2.1.5 主要仪器设备

2.1.6 细胞转染

2.1.7 酵母双杂交技术

2.1.8免疫共沉淀试验（Co-IP）

2.1.9 共聚焦试验

2.1.10 用CRISPR/Cas9系统构建DNAJA3基因敲除的PK-15细胞系

2.1.11 Western blotting分析

2.1.12 RNA的提取和反转录

2.1.13 蛋白酶体、溶酶体和凋亡通路抑制剂试验

2.1.14 RNA干扰试验

2.1.15 双荧光报告试验

2.1.16病毒滴度测定

2.1.17细胞活力测定

2.1.18 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

2.1.19 统计学分析

2.2 试验结果

2.2.1 酵母双杂交筛选与VP1相互作用的宿主蛋白

2.2.2 酵母共转化验证DNAJA3与FMDV VP1的相互作用

2.2.3 免疫共沉淀试验验证DNAJA3与FMDV VP1的相互作用

2.2.4 激光共聚焦试验验证DNAJA3与FMDV VP1的相互作用

2.2.5 DNAJA3与FMDV VP1相互作用的区段筛选

2.2.6 VP1与DNAJA3互作位点的筛选

2.2.7 VP1与DNAJA3的内源性互作

2.2.8 VP1与DNAJA3互作的关键位点

2.2.9 过表达DNAJA3对FMDV复制的影响

2.2.10 筛选沉默DNAJA3效率最好的干扰RNA

2.2.11 下调DNAJA3对FMDV复制的影响

2.2.12 DNAJA3在BHK-21和PK-15细胞上对FMDV复制的影响

2.2.13 构建DNAJA3敲除细胞系

2.2.14 DNAJA3-KO细胞对FMDV复制的影响

2.2.15 DNAJA3对VP1蛋白的影响

2.2.16 DNAJA3对FMDV其他蛋白的降解情况

2.2.17 DNAJA3对VP1半衰期的影响

2.2.18 DNAJA3降解VP1的通路

2.2.19 细胞活力的检测

2.2.20 DNAJA3降解VP1的关键区域

2.2.21 DNAJA3对细胞自噬的影响

2.2.22 DNAJA3影响溶酶体通路的机制

2.2.23 DNAJA3与LC3互作区段

2.2.24 DNAJA3诱导自噬溶酶体通路的关键区域

2.2.25 VP1对IFN-β信号通路的影响

2.2.26 VP1对IFN-β信号通路影响的机制

2.2.27 VP1对IRF3磷酸化的影响

2.2.28 VP1对IRF3二聚体的影响

2.2.29 VP1对IRF3核转移的影响

2.2.30 过表达DNAJA3在VP1对IFN-β信号通路中的作用

2.2.31 敲除DNAJA3在VP1对IFN-β信号通路中的作用

2.2.32 DNAJA3和VP1对IFN-β及其下游ISGs基因表达的影响

2.2.33 内源性DNAJA3对VP1抑制IRF3磷酸化的影响

2.3 讨论

第三章 RNF5抑制FMDV复制的机制研究

3.1 材料和方法

3.1.1 细胞与病毒

3.1.2 试剂和抗体

3.1.3 质粒构建

3.1.4 溶液的配制

3.1.5 主要仪器设备

3.1.6 细胞转染

3.1.7 免疫共沉淀试验（Co-IP）

3.1.8 共聚焦试验

3.1.9 Western blotting分析

3.1.10 RNA的提取和反转录

3.1.11 RNA干扰试验

3.1.12 病毒滴度测定

3.1.13 细胞活力测定

3.1.14 统计学分析

3.2 试验结果

3.2.1 FMDV感染对RNF5的影响

3.2.2 过表达RNF5对FMDV复制的影响

3.2.3 检测SiRNF5的干扰效果

3.2.4 下调RNF5对FMDV复制的影响

3.2.5 RNF5 E3连接酶活性对FMDV复制的影响

3.2.6 RNF5对FMDV蛋白的影响

3.2.7 RNF5对VP1的影响

3.2.8 RNF5对VP1半衰期的影响

3.2.9 FMDV感染细胞中RNF5对VP1病毒蛋白的影响

3.2.10 RNF5降解VP1的通路研究

3.2.11 RNF5降解VP1的机制研究

3.2.12 VP1与RNF5互作区段研究

3.2.13 VP1与RNF5的亚细胞定位

3.2.14 RNF5与FMDV VP1内源性共定位情况

3.2.15 RNF5对VP1蛋白泛素化影响

3.2.16 RNF5对微RNA病毒科其他病毒VP1蛋白的影响

3.3 讨论

第四章 全文结论

参考文献

致谢

作者简历