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摘要
第一章 绪论
1.1 基因治疗概述
1.2 非病毒基因载体(Non-viral Vector)
1.2.1 阳离子聚合物(Cationic Polymer)
1.2.2 常见的阳离子聚合物基因载体
1.2.3 阳离子聚合物载体介导基因转染的一般过程
1.3 聚乙烯亚胺(Polyethyrlenimine,PEI)
1.3.1 高分子量PEI的修饰与改性
1.3.2 低分子量PEI的修饰与改性
1.4 含原酸酯的阳离子聚合物基因载体
1.5 选题思路及研究内容
第二章 基于原酸酯交联的低分子量PEI基因载体(POEI)
2.1 引言
2.2 实验试剂和仪器
2.2.1 实验试剂
2.2.2 实验仪器
2.3 实验方法
2.3.1 丙烯酸类原酸酯单体(OEAc)的合成
2.3.2 聚合物POEI的合成
2.4 合成产物的表征
2.4.1 结构表征
2.4.2 POEI的伯胺含量测定
2.4.3 POEI质子缓冲能力的测定
2.4.4 POEI的酸敏感性检测
2.5 结果与讨论
2.5.1 二羟基原酸醅单体(OEDg)的核磁共振谱图分析
2.5.2 丙烯酸类原酸酯单体(OEAc)的核磁共振谱图分析
2.5.3 聚合物POEI的表征
2.6 本章小结
第三章 POEI/DNA复合物的制备及表征
3.1 引言
3.2 实验试剂和仪器
3.2.1 菌种与报告基因
3.2.2 实验试剂
3.2.3 实验仪器
3.3 实验方法
3.3.1 菌种培养与无内毒素质粒提取
3.3.2 pEGFP-N1质粒的纯度及浓度测定
3.3.3 聚合物POEI/DNA复合物的制备
3.3.4 琼脂糖凝胶电泳阻滞实验
3.3.5 肝素置换实验
3.3.6 DNase I酶降解实验
3.3.7 POEI/DNA复合物的粒径以及Zeta电位测定
3.3.8 POEI/DNA复合物酸敏感性分析
3.4 结果与讨论
3.4.1 凝胶电泳阻滞实验
3.4.2 肝素置换实验
3.4.3 DNase I酶降解实验
3.4.4 POEI/DNA复合物的粒径与Zeta电位
3.4.5 POEI/DNA复合物的酸敏感性实验
3.5 本章小结
第四章 POEI的细胞毒性评价及其介导的体外基因转染研究
4.1 引言
4.2 实验试剂和仪器
4.2.1 实验试剂
4.2.2 实验仪器
4.3 实验方法
4.3.1 细胞培养
4.3.2 细胞毒性实验
4.3.3 聚合物介导DNA的体外转染实验
4.4 结果与讨论
4.4.1 POEI的细胞毒性
4.4.2 POEI介导的体外基因转染
4.5 本章小结
结论
参考文献
致谢
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