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摘要
第一章 引言
1.1 基因治疗概述
1.2 基因传递体系
1.2.1 非病毒基因传递系统
1.3 刺激响应性聚阳离子基因载体
1.3.1 pH敏感基因载体
1.3.2 氧化还原敏感基因载体
1.3.3 温度敏感基因载体
1.4 阳离子聚合物载体介导基因传递面临的障碍及解决措施
1.4.1 血液循环的稳定性
1.4.2 靶向细胞摄取
1.4.3 内涵体逃逸
1.4.4 细胞核进入
1.5 选题思路及研究内容
1.5.1 选题思路
1.5.2 研究内容
第二章 酸敏感聚(原酸酯氨基醇)的制备与表征
2.1 引言
2.2 实验试剂及仪器
2.2.1 实验试剂
2.2.2 实验仪器
2.3 实验内容
2.3.1 实验试剂的纯化
2.3.2 AOE的合成
2.3.3 聚(原酸酯氨基醇)(POEAAs)的合成
2.4 表征方法
2.4.1 核磁共振氢谱(1H NMR)检测
2.4.2 凝胶渗透色谱(GPC)检测
2.4.3 聚(原酸酯氨基醇)(POEAAs)的酸敏感性检测
2.5 结果与讨论
2.5.1 化合物2的1H NMR图谱分析
2.5.2 AOE的1H NMR图谱分析
2.5.3 POEAAs的1H NMR图谱分析
2.5.4 POEAAs的GPC分析
2.5.5 POEAAs的酸敏感性结果分析
2.6 本章小结
第三章 POEAAs/DNA复合物的制备与表征
3.1 引言
3.2 实验试剂及仪器
3.2.1 实验试剂
3.2.2 实验仪器
3.3 实验方法
3.3.1 质粒DNA的大量制备与纯化
3.3.2 POEAAs/DNA复合物的制备
3.3.3 琼脂糖凝胶电泳阻滞实验
3.3.4 EB排阻实验
3.3.5 粒径和Zeta电位测定
3.3.6 DNase Ⅰ酶解实验
3.3.7 肝素置换实验
3.3.8 BSA蛋白吸附实验
3.3.9 复合物释放DNA实验
3.4 结果与讨论
3.4.1 琼脂糖凝胶电泳阻滞实验
3.4.2 EB排阻实验
3.4.3 粒径和Zeta电位的测量
3.4.4 DNase Ⅰ酶解实验
3.4.5 肝素置换实验
3.4.6 BSA蛋白吸附实验
3.4.7 复合物释放DNA实验
3.5 本章小结
第四章 聚阳离子载体POEAAs介导体外细胞转染及细胞毒性研究
4.1 引言
4.2 实验试剂及仪器
4.2.1 实验试剂
4.2.2 实验仪器
4.3 实验方法
4.3.1 细胞培养
4.3.2 细胞毒性实验
4.3.3 POEAAs介导293T细胞转染实验
4.4 结果与讨论
4.4.1 POEAAs的细胞毒性
4.4.2 POEAAs介导293T细胞转染
4.5 本章小结
主要结论与展望
参考文献
致谢
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