多花黄精组培体系建立及甾体皂苷成分提取

摘要

多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)，隶属百合科(Liliaceae)黄精属(Polygonatum)，性平、味甘，具有补肾益精、降血糖、降血压、降血脂、提高人体免疫力、抗衰老、抗肿瘤等功效，是药食同源的多年生草本植物，为中国传统大宗药材，具有很好的开发与应用价值。多花黄精中的甾体皂苷主要有薯蓣皂苷、薯蓣皂苷元等，具有降血糖、抗肿瘤、抗HIV的生物活性。
　　在人工栽培中受种子发芽率低下、育苗周期长等因素影响，多花黄精通过自然繁殖的方式无法满足市场需求。较传统栽培方式，组织培养不受季节、取材数量等因素制约，可在短期内大规模繁殖性状稳定的优良种苗。同时毛状根具有生长速度快、合成次生代谢物质能力强且稳定等优点，因此，可以利用毛状根液体培养技术生产甾体皂苷。本研究建立UPLC法同时测定多花黄精野生植株和毛状根中薯蓣皂苷和薯蓣皂苷元的含量，为黄精资源的利用提供科学依据。
　　研究结果如下:
　　1.低温沙藏、培养基中添加不同浓度激素处理种子，找出萌发率较高的处理方法，即0℃沙藏100 d，接种到MS+2.0 mg/L6-BA培养基中，野生多花黄精种子发芽率最高，达到43.7％。
　　2.通过三因素三水平正交实验，筛选出多花黄精最适快繁培养基配方为:MS+1.0 mg/L6-BA+0.5 mg/L NAA+0.3 mg/L IAA，芽增殖系数达到3.2，并且长势良好;最适生根培养基为1/2MS+1.0 mg/L NAA，平均生根率达到86.92％;炼苗最适基质为泥炭土∶沙子2∶1。
　　3.采用正交设计方法，探究毛状根最佳液体培养条件:培养基为液体1/2MS，pH为5.8，摇床转速150 r/min，26℃暗培养，增殖倍数达到9.4。
　　4.优化超声波法提取甾体皂苷的提取方法，以75％的乙醇作为提取剂，料液比1∶15，超声2h后，用正丁醇萃取。
　　5.采用超高效液相色谱法(UPLC)对多花黄精野生植株和毛状根中薯蓣皂苷和薯蓣皂苷元含量进行统计分析，野生植株根茎中薯蓣皂苷和薯蓣皂苷元含量分别为106.27μg/g、84.95μg/g，毛状根中薯蓣皂苷和薯蓣皂苷元含量分别为89.13μg/g、72.24μg/g。

目录

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摘要

第一章 绪论

1．1 多花黄精概述

1．1．1 多花黄精植物形态

1．1．2 多花黄精的药理研究

1．1．3 多花黄精的应用

1．2 黄精属甾体皂苷

1．2．1 甾体皂苷概述

1．2．2 黄精属甾体皂苷的研究近况

1．2．3 甾体皂昔提取检测方法研究进展

1．3 黄精组织培养

1．3．1 植物组织培养概述

1．3．2 黄精组织培养现状

1．3．3 药用植物组培的优点

1．4 毛状根

1．4．1 毛状根概述

1．4．2 毛状根产次生代谢产物研究

1．4．3 影响毛状根生长及代谢产物积累的因素

1．5 研究目的和意义

1．5．1 研究目的

1．5．2 研究意义

第二章 实验材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 植物材料

2．1．2 主要实验试剂

2．1．3 主要仪器设备

2．1．4 实验中部分培养基

2．2 实验方法

2．2．1 多花黄精组织培养研究

2．2．2 毛状根诱导及液体培养

2．2．3 甾体皂苷提取及含量检测

2．2．4 数据处理

第三章 结果与分析

3．1 多花黄精组织培养研究

3．1．1 野生黄精种子萌发

3．1．2 快繁培养基筛选

3．1．3 组培苗生根培养基

3．1．4 炼苗移栽

3．2 毛状根诱导及液体培养

3．2．1 毛状根诱导

3．2．2 多花黄精毛状根PCR检测

3．2．3 毛状根生长血线绘制

3．2．3 液体培养条件优化

3．3 甾体皂苷提取及含量检测

3．3．1 超声波法提取甾体皂苷

3．3．2 线性关系考察

3．3．3 精密度实验

3．3．4 稳定性实验

3．3．5 重复性实验

3．3．6 加样回收率实验

3．3．7 不同供试品中薯蓣皂苷和薯蓣皂苷元含量测定

第四章 讨论与结论

4．1 讨论

4．1．1 黄精种子休眠

4．1．2 激素对多花黄精增殖、生根的影响

4．1．3 培养条件对毛状根液体培养的影响

4．1．4 不同供试品中甾体皂苷含量差异

4．2 结论

4．3 展望

参考文献

附录

致谢

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