miR-431靶作用基因调控耳蜗功能的研究及双侧耳道闭锁患者Baha效果分析

摘要

第一部分基础研究　　miR-431靶作用Eya4基因调控耳蜗功能的研究　　目的研究miR-431对耳蜗功能的影响及与耳聋的关系，以补充阐明遗传性耳聋的病因。同时探讨miR-431调控耳蜗功能的可能分子机制，为遗传性耳聋的预防和治疗提供理论基础。　　方法 主要采用Real-time PCR和microRNA原位杂交技术确定miR-431在小鼠耳蜗的时空表达谱。利用已构建的miR-431转基因(Transgenic，Tg)小鼠，进行听性脑干反应(ABR)测试评估小鼠听力，在动物水平了解miR-431对耳蜗功能的影响。利用小鼠基底膜铺片和耳蜗切片等技术探求miR-431转基因小鼠导致听力下降的耳蜗结构变化。应用生物信息学软件预测并利用双荧光素酶报告基因系统明确miR-431的靶基因。最后利用PC12细胞和原代培养的新生小鼠螺旋神经节细胞，在细胞水平进一步验证miR-431对神经元发育和分化的影响。　　结果 miR-431在新生小鼠的耳蜗中的螺旋神经节、Corti器和血管纹中高表达，表达量随小鼠发育而逐渐减少。检测了A和B两个系13周龄的miR-431 Tg小鼠和同窝的野生型(Wildtype，Wt)小鼠的听力，miR-431 Tg小鼠听觉反应域明显高于Wt小鼠。miR-431 Tg小鼠基底膜毛细胞可见点状缺失，螺旋神经节细胞分布较Wt小鼠稀疏，石蜡切片上测量Rosenthal小管中螺旋神经节细胞密度显示，miR-431 Tg小鼠明显低于wt小鼠。本研究发现，Eya4是miR-431的一个靶基因，miR-431 Tg小鼠耳蜗中EYA4蛋白的含量减少。在PC12细胞中过表达miR-431抑制PC12细胞的分化。同时，miR-431 Tg小鼠耳蜗原代螺旋神经节细胞成熟神经元数量和轴突长度降低。　　结论 miR-431在小鼠耳蜗中过表达可导致小鼠听力下降。miR-431的高表达抑制了其靶基因Eya4的翻译，使EYA4蛋白形成受阻，进而导致螺旋神经节细胞数量减少，损害了听觉信号传导径路。　　第二部分临床研究　　双侧耳道闭锁患者Baha效果分析　　目的评估双侧先天性耳道闭锁患者应用骨锚式助听器(Bone-anchored hearing aid，Baha)后的听力效果及满意度，并分析术后并发症发生情况及预防和处理方法。　　方法 对16例行单侧Baha植入术的双侧先天性耳道闭锁患者进行回顾性分析。分别测试患者在声场中裸耳与应用植入式Baha后的平均听阈，并应用普通话言语测听材料(Mandarin Speech Test Materials，MSTM)测试言语识别率(Speech Discrimination Scores，SDS)及言语识别阈(Speech Reception Threshold，SRT)。以Baha应用情况调查问卷和儿童格拉斯格受益列表(Glasgow children's benefit inventory， GCBI)评估患者应用Baha后的生活质量提高程度和满意度。总结16例患者术后皮肤并发症的发生情况和处理方法。　　结果 患者裸耳平均听阈为61.6±7.8 dB HL，应用植入式Baha后平均听阈为23.8±5.9 dB HL。在45 dB HL和65 dB HL给声强度下，裸耳SDS分别为6.7±7.4%和56.5±7.4%．应用植入式Baha后SDS提高至86.5±4.4%和90.1±3.4%。裸耳平均SRT为60.6±7.5 dB HL，应用植入式Baha后降至24.7±5.0 dB HL。Baha应用情况调查问卷显示患者应用Baha均获得满意效果，GCBI平均受益分数为45.6±14.4分。16例患者中共发生皮肤并发症5例。对卜2级皮肤反应者给予局部抗生素处理；3级反应者行二次手术切除增生皮肤及肉芽组织，其中1例患者更换9 mm桥基。　　结论 双侧先天性耳道闭锁患者应用植入式Baha后听阈及言语识别能力得到明显提高，生活质量亦获得显著改善，患者主观满意度较高。桥基周围皮肤感染、皮肤过度增生是Baha植入术最常见的并发症。

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