抗Siglec--15单克隆抗体的制备与研究

目录

声明

摘要

符号和缩略词说明

第一章绪论

1．1引言

1．2 Siglecs家族简介

1．3 Siglec-15的发现及研究

1．4免疫疗法的进程与发展

1．5单克隆抗体技术在肿瘤免疫治疗中的应用

1．6本课题研究的目的、意义、主要内容及创新之处

1．6．2本课题研究的主要内容

1．6．3本课题的创新之处

第二章CHO-K1 Siglec-15工程细胞株的构建

2．1主要仪器与实验材料

2．1．1主要仪器

2．1．2主要实验材料

2．1．3主要溶液的配制

2．2主要实验方法

2．2．1慢病毒制备

2．2．2嘌呤霉素使用浓度的测定

2．2．3慢病毒感染

2．2．4流式验证阳性细胞

2．2．5阳性多克隆细胞冻存

2．2．5阳性单克隆筛选

2．3结果与讨论

2．3．1嘌呤霉素工作浓度的测定

2．3．2流式细胞术筛选阳性多克隆细胞

2．3．3流式细胞术筛选阳性单克隆细胞

第三章免疫抗原以及筛选抗原的制备

3．1主要仪器与实验材料

3．1．1主要仪器

3．1．2主要实验材料

3．1．3主要溶液的配制

3．2主要实验方法

3．2．1质粒获取

3．2．2抗原表达

3．2．3抗原纯化

3．2．4 SDS-PAGE分析蛋白纯度

3．2．5 ELISA验证抗原功能

3．3结果与讨论

3．3．3免疫抗原Siglec-15-mIgG和筛选抗原Siglec-15-his的SDS-PAGE纯度鉴定

3．3．4免疫抗原Siglec-15-mIgG和筛选抗原Siglec-15-his的ELISA功能检测

第四章抗Siglec-15单克隆杂交瘤细胞制备

4．1主要仪器与实验材料

4．1．1主要仪器

4．1．2主要实验材料

4．1．3主要溶液的配制

4．2主要实验方法

4．2．1小鼠免疫

4．2．2小鼠血清效价测定

4．2．3细胞融合

4．2．4杂交瘤多克隆细胞株筛选

4．2．5杂交瘤单克隆筛选

4．3结果与讨论

4．3．1小鼠的免疫

4．3．2 ELISA方法测定小鼠血清效价

4．3．3细胞融合

4．3．4杂交瘤多克隆细胞株筛选

4．3．5杂交瘤单克隆细胞株筛选

第五章抗Siglec-15杂交瘤抗体的制备及鉴定

5．1主要仪器与实验材料

5．1．1主要仪器

5．1．2主要实验材料

5．1．3主要溶液的配制

5．2主要实验方法

5．2．1杂交瘤细胞扩大培养及抗体上清获取

5．2．2杂交瘤抗体的纯化

5．2．3 SDS-PAGE测定抗体纯度

5．2．4 ELISA方法测定抗体特异性结合

5．2．5 FACS方法测定抗体特异性结合

5．3结果与讨论

5．3．2单克隆抗体纯度分析

5．3．3单克隆抗体特异性结合鉴定

结论

展望

参考文献

致谢

作者简介

导师简介