产富马酸及富马酸衍生物基因工程菌的构建

目录

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摘要

第一章绪论

1．1富马酸概述

1．1．1富马酸的理化性质

1．1．2富马酸的应用

1．2富马酸的生产方法

1．2．1化学工业生产富马酸

1．2．2酶法生产富马酸

1．2．3发酵法生产富马酸

1．3富马酸的代谢途径

1．3．1富马酸的合成及代谢

1．3．2 TCA循环中与富马酸代谢相关的关键基因

1．3．3辅因子对富马酸的影响

1．4富马酸衍生物概述

1．4．1富马酸酯

1．4．2富马酸聚醮

1．4．3生物法生产富马酸酯

1．5本文研究思路及内容

第二章探究TCA循环强度和辅因子对富马酸积累的影响

2．1引言

2．2实验材料与仪器

2．2．1菌种及质粒

2．2．2引物、培养基及实验试剂

2．2．3实验仪器

2．3实验方法及分析条件

2．3．1 pACYCDuet-gltA-acnA表达载体及重组菌株的构建

2．3．2调节辅因子表达载体及重组菌株的构建

2．3．3重组菌的摇瓶发酵

2．3．5 NAD+／NADH的测定

2．4结果及分析

2．4．1 pACYCDuet-gltA-acnA表达载体及重组菌株的构建

2．4．2调节辅因子表达载体及重组菌株的构建

2．4．3重组菌的摇瓶发酵

2．4．4胞内辅因子的检测

2．5本章小结

第三章富马酸基因工程菌的优化

3．1引言

3．2实验材料与仪器

3．2．1菌种及质粒

3．2．2引物、培养基及实验试剂

3．2．3实验仪器

3．3实验方法及分析条件

3．3．1表达载体及重组菌株的构建

3．3．2重组菌的摇瓶发酵

3．3．3生物量及产物的分析检测

3．3．4胞内NAD+／NADH检测

3．4结果分析

3．4．1表达载体及重组菌株的构建

3．4．2重组菌的摇瓶发酵

3．4．3胞内辅因子的检测

3．5本章小结

第四章合成富马酸酯相关基因的表达

4．1引言

4．2实验材料与仪器

4．2．1菌种与质粒

4．2．2引物、培养基及实验试剂

4．2．3实验仪器

4．3实验方法及分析条件

4．3．1重组菌株的构建

4．3．2合成富马酸酯相关酶的表达

4．3．3酶活及酶学性质的测定

4．4结果分析

4．4．1重组菌的构建

4．4．2重组菌的表达

4．4．3酶活及酶学性质的测定

4．5本章小结

第五章结论与展望

参考文献

附录

致谢

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