人乳头瘤病毒—黑色素瘤抗原CTL表位嵌合基因克隆及其表达

摘要

目的：构建人乳头瘤病毒(HPV)6b型结构蛋白L1-黑色素瘤抗原(MAGE-A3)细胞毒T淋巴细胞(CTL)表位的嵌合基因，通过基因克隆并在昆虫细胞中表达，为进一步研究其免疫原性、免疫学效应及制备HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌合疫苗治疗胃肠道肿瘤提供理论基础和实验依据。 方法：选择HPV6bL1基因和MAGE-A3上的CTL表位氨基酸序列的基因，将MAGE-A3CTL表位基因插入到HPV6bL1的羧基端序列中。用Premier5.0和Vector软件设计HPV6bL1/MAGE-A3-CTL(899-924)嵌合基因的特异性引物(ozlf-17)，以质粒pVL1393/HPV6bL1/16E7为模板，经PCR扩增，将PCR扩增产物与PUCm-T载体连接，转入大肠杆菌E.ColiJM109感受态细胞形成TA克隆，通过氨苄耐药基因进行蓝白斑筛选，提取阳性克隆菌株的质粒DNA，进行PCR鉴定和限制性核酸内切酶BamHI和HindⅢ双酶切鉴定。 结论：1.成功克隆了HPV6bL1/MAGE-A3-CTL899-924嵌合基因。2.成功构建了pFastBacTM1/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL899-924质粒。3.获得了重组杆状病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL899-924。4.重组杆状病毒Bacmid/HPV6bL1/MAGE-A3-CTL899-924感染sf-9昆虫细胞经SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝染色和Western-blot分析鉴定，成功表达了嵌合目的蛋白HPV6bL1/MAGE-A3-CTL899-924。5.为进一步将嵌合蛋白纯化、免疫动物进行免疫学效应研究做好准备，为最终制备HPV6bL1/MAGE-A3-CTL嵌合疫苗提供了实验依据和理论基础。

目录

前言

材料与方法

实验结果

分析与讨论

小结

参考文献

致谢

综述：胃肠道肿瘤相关抗原及其应用

参考文献

已发表文章：胃肠道肿瘤相关抗原及其应用