医用生物蛋白胶及其主体成分纤维蛋白原的免疫原性研究

摘要

目的： 研究医用生物蛋白胶(FS)及其主体成分纤维蛋白原的潜在免疫原性，旨在为临床应用提供参考，为哺乳动物来源的生物蛋白胶进一步开发优化奠定实验基础。 方法： 采用SDS-PAGE电泳、Westernblot实验技术分离确定主体胶成分中的纤维蛋白原蛋白，建立间接ELISA法检测纤维蛋白原抗体的检测条件。新西兰白兔创伤实验及BALB/c小鼠实验考察医用生物蛋白胶及其主体成分纤维蛋白原的免疫原性。新西兰白兔创伤实验：使用天绣医用生物蛋白胶封闭创伤切口，定期采血检测兔血清中纤维蛋白原多克隆抗体水平，Westernblot技术鉴定血清抗体成分。在成功实现一次创伤实验后，在此基础上实施二次创伤实验。BALB/c小鼠实验：(1)淋巴细胞转化实验(MTT比色法)：分别考察了腹腔注射生物蛋白胶混合液、多次注射生物蛋白胶主体成分以及不同剂量注射生物蛋白胶主体成分对淋巴细胞增殖能力的影响；(2)抗体检测：检测小鼠血清中的抗生物蛋白胶主体成分的抗体水平；(3)NBT试验：检测小鼠腹腔注射生物蛋白胶后中性粒细胞吞噬能力有无增强。 结果： 1.在有效分离鉴定胶主体成分纤维蛋白原的前提下，确立检测纤维蛋白原抗体的间接ELISA检测条件：最佳蛋白包被浓度0.5μg/mL。 2.成功建立了兔创伤模型。以间接ELISA方法检测兔使用生物蛋白胶后血清抗体水平，发现在FS封闭后2周封闭组血清抗体水平明显升高，6周后下降，呈先升高后下降的动态变化趋势，呈现“一过性”，进一步以Westernblot方法鉴定血清中的抗体成分，证实NC膜上在对应于凝胶蛋白条带位置约300kDa处出现的棕褐色阳性杂交印记为纤维蛋白原抗体，初步表明血清中主要的抗体成分为纤维蛋白原抗体。二次使用FS后，抗体变化规律大致与第一次使用生物蛋白胶变化相同，但高抗体水平持续时间较长。 3.淋巴细胞转化实验结果表明淋巴细胞转化增殖能力不因注射成分的变化、注射量的变化、注射次数的变化而变化。 4.在小鼠通过腹腔注射途径进行免疫后，实验组血清抗体水平与对照组无明显差异(P＞0.05)。 5.在小鼠中心粒细胞-NBT试验中没有发现胞质中有蓝紫或蓝黑颗粒沉着的阳性细胞。 结论： 1.在兔创伤实验中，应用生物蛋白胶后，兔血清出现抗胶主体成分纤维蛋白原蛋白的抗体，持续一段时间，抗体水平变化规律呈一过性升高趋势，重复使用生物蛋白胶后，可出现同样的变化规律，提示天绣医用生物蛋白胶在兔可以引发抗体的产生，表现出一定的免疫原性。 2.淋巴细胞转化实验结果提示生物蛋白胶混合液及主体成分无明显刺激淋巴细胞增殖的能力，在小鼠表现出弱的免疫原性。 3.腹腔注射FS后，小鼠血清没有检测到相应抗体。 4.NBT试验提示倍绣FS应用于小鼠时小鼠中性粒细胞吞噬功能没有明显增强。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文缩写对照表

声明

前言

材料与方法

1实验材料

2实验方法

3统计方法

结果

1主体胶蛋白成分分离及纤维蛋白原蛋白的确定

2纤维蛋白原包被浓度的确定

3兔创伤切口应用生物蛋白胶后愈合过程

4兔血清多克隆抗体检测

5小鼠血清检测

6淋巴细胞转化实验

7中性粒细胞吞噬实验

分析与讨论

结论

参考文献

附录 个人信息

致谢

综述 生物蛋白胶的应用进展