谷胱甘肽转硫酶（M1、T1、P1）基因型与浙江汉族人群散发性大肠癌易感性的关系

摘要

目的： 探讨谷胱甘肽转硫酶(GST)M1、T1、P1基因型与中国浙江汉族人群散发性大肠癌(SCRAC)易感性的关系。 方法： 1、选取经病理组织学确诊的120例SCRAC患者，均来自我院消化内科及普外科住院或门诊患者；204例健康对照来自同期我院体检中心健康体检者。全部研究对象均为无血缘关系的中国浙江汉族人，SCRAC患者采血前均未行放射及化学治疗。 2、提取基因组DNA：采用蛋白酶K/酚/氯仿法抽提DNA，紫外分光光度计定量，4℃保存备用。 3、分别对GSTM1、GSTT1、GSTP1基因进行多态性检测。 3.1采用多重聚合酶链反应(Multi-PCR)技术分别扩增GSTM1、GSTT1目的基因，以β球蛋白(268bp)为参照物，用5％聚丙烯酰胺凝胶电泳及1.8％硝酸银染色检测PCR产物，GSTM1、GSTT1扩增后产物长度分别为157bp、480bp。GSTM1、GSTT1基因型判断：若有157bp片段和480bp片段者分别为GSTM1(+)和GSTT1(+)，而无相应的扩增产物者为纯合子基因缺失，分别为GSTM1(-)(即空白GSTM1基因型)和GSTT1(-)(即空白GSTT1基因型)。 3.2采用多重聚合酶链反应技术扩增GSTP1目的基因，PCR反应产物用BsmAⅠ限制性内切酶消化，以β球蛋白(268bp)为参照物，酶切产物用8％聚丙烯酰胺凝胶电泳及1.8‰硝酸银染色检测。GSTP1基因型判断：若酶切产物含329bp、113bp两个片段，则为ILe/ILe基因型(野生型)；若酶切产物含329bp、216bp、113bp三个片段，则为ILe/VaL基因型(杂合突变型)；若酶切产物含216bp、113bp两片段，则为VaL/VaL基因型(纯合子突变型)。 4、进行统计学处理，分析比较GSTM1、GSTT1、GSTP1基因型在SCRAC患者和健康人群中的分布差异。将所有数据输入SPSS11.5统计软件包，采用x2检验分析数据，计算OR值和95％可信区间，P＞0.05有统计学意义。 结果： GSTM1(-)、GSTT1(-)及GSTP1突变基因型(VaL/VaL)频率在SCRAC组和对照组分布均有显著性差异(57.5％vs44.1％，x2=5.414，P=0.020，OR=1.714，95％CI：1.087～2.702:53.3％vs41.7％，x2=4.140，P=0.042，OR=1.600，95％CI:1.016～2.519:45.0％vs30.4％，x2=7.015，P=0.008，OR=1.874，95％CI:1.174～2.990)。根据SCRAC临床特征进一步分层分析，发现GST(M1、T1、P1)基因型均与年龄因素无关(P＞0.05)；GSTM1(-)及GSTP1突变基因型(VaL/VaL)在远端SCRAC(P=0.035；P=0.036)、DukesC期SCRAC(P=0.002；P=0.029)及低分化SCRAC(P=0.013；P=0.006)中的分布频率均明显增高；GSTT1(-)基因型则仅在低分化SCRAC中明显增高(P=0.040)，而与SCRAC的部位及Dukes分期无关(P＞0.05)。 结论： GST基因多态性与中国浙江汉族人群SCRAC明显相关，携带GSTM1(-)、GSTT1(-)及GSTP1突变基因型(VaL/VaL)者发生SCRAC的易感性增加。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

材料与方法

一、研究对象与材料

(一)研究对象

(二)主要设备

(三)主要试剂

(四)主要溶液的配制

二、研究方法

(一)蛋白酶K/酚/氯仿法提取基因组DNA

(二)GSTM1、GSTT1基因多态性检测

(三)GSTP1基因型检测

(四)统计学处理

附图

结果

讨论

结论

参考文献

附录

致谢

综述 谷胱甘肽转硫酶与消化系统疾病相关性的研究进展