丹参对冻融小鼠卵巢组织移植早期促进卵泡发育和血管生成作用的研究

摘要

目的：
　　 探讨丹参对冻融小鼠卵巢组织移植早期促进卵泡发育和血管生成作用的研究。
　　 方法：
　　 实验一:收集C57BL/6j雌鼠和BALB/c雄鼠杂交后的F1代第一天(d1)小鼠卵巢慢冻速融后移植至8～12周龄的雄鼠肾脏被膜下,移植后小鼠按给药不同分为生理盐水组和低(0.4ml/kg)、中(4ml/kg)、高(40ml/kg)剂量丹参干预组,分别于移植后第二天(2d)、第七天(7d)和第十四天(14d)回收卵巢移植物。光镜和电镜技术观察卵巢组织冻融前后和移植前后的组织形态学改变、计数卵泡数量、免疫组织化学技术检测细胞凋亡、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial GrowthFactor,VEGF)的表达和计数微血管密度。
　　 实验二:收集C57BL/6j雌鼠和BALB/c雄鼠杂交的F1代4周龄小鼠卵巢,慢冻速融后移植至F1代8～12周龄的雄鼠肾脏被膜下,移植后小鼠按给药不同分为丹参组(4ml/kg)和生理盐水组,分别于移植后1d(24h),2d(48h)和7d回收卵巢移植物,将冻融以及移植后不同时间段的卵巢组织HE染色后行卵泡计数、免疫组织化学分析及RT-PCR法检测血管相关基因VEGF的表达。
　　 结果：
　　 实验一:
　　 1、小鼠卵巢经冻融后原始卵泡的存活率为88.8％。
　　 2、光、电镜观察卵巢组织移植后7d卵泡细胞和颗粒细胞结构欠完整,移植后14d卵泡结构恢复正常。
　　 3、移植后14d丹参组各级卵泡数及卵泡存活率多于生理盐水组(12.7％),尤以高、中剂量丹参组(31.2％、24.2％)差异显著(P<0.05)；移植后VEGF蛋白表达呈上升趋势,至14d仍维持较高水平,尤以高、中剂量丹参组差异显著(P<0.05)；移植卵巢组织后各时间段细胞凋亡指数逐渐下降,移植后14d高、中剂量丹参组细胞凋亡指数最低(2.53±0.03％、3.25±0.02％)。
　　 实验二:
　　 1、移植卵巢组织各时间段丹参组的卵巢卵泡计数及卵泡存活率均高于生理盐水对照组,P<0.05。
　　 2、移植小鼠卵巢组织血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达有上升趋势,第7d达最高峰,两组之间无显著性差异,P>0.05。
　　 3、移植卵巢组织各时间段丹参组的细胞凋亡指数均低于生理盐水对照组,P<0.05。
　　 4、移植后48h VEGF164 mRNA和VEGF188 mRNA的表达量增加,且丹参组高于对照组,两组之间有显著性差异,P<0.05；而两组之间VEGF120 mRNA的表达无明显变化,P>0.05。
　　 结论：
　　 1、结合光镜和电镜观察能更全面地评价冻融过程和移植过程对小鼠卵巢组织的影响。常规慢冻.速融方法能较好保存小鼠卵巢组织原始卵泡的形态结构。移植早期的缺血缺氧对小鼠卵巢组织造成了远比冻融过程更严重的损伤,其主要发生在移植后一周内。
　　 2、冻融小鼠卵巢组织移植后原始卵泡能存活并生长发育成窦卵泡。
　　 3、VEGF的表达在冻融小鼠卵巢组织移植早期血管生成过程中显示了重要的作用。
　　 4、丹参能促进移植后冻融小鼠卵巢卵泡发育、减少细胞凋亡,以高、中剂量丹参作用明显,其可能与提高移植卵巢组织内血管相关基因VEGF(主要是VEGF164mRNA和VEGF188mRNA)的表达促进移植后早期血管化作用有关。