单家系2型神经纤维瘤病基因测序

摘要

目的：
　　 对我院诊治的2型神经纤维瘤病家系病例资料(1996-2008)进行回顾性分析，采集外周血(9例正常，3例患者)及肿瘤石蜡标本(7块，3例患者)提取基因组DNA，应用测序仪(ABI3730XL)对NF2基因1-17外显子及其两端内含子直接测序，确定该家系NF2基因突变形式。
　　 方法：
　　 一．参照OMEGA公司提供的E．Z．N．A．石蜡组织基因组DNA纯化试剂盒(D3399-01)操作手册，提取外周血及石蜡标本基因组DNA，分光光度计测定(A260/A280)比值，据此估算提取产物DNA浓度。
　　 二．利用Primer5软件设计引物，1-17外显子及其两端部分内含子，引物合成由上海基康生物有限公司完成。外周血及石蜡标本均才用巢式PCR进行扩增，产物进行凝胶电泳，初步判断扩增效率，逐步优化反应条件。
　　 三．PCR产物经凝胶电泳证实为单一条带后，足量PCR产物送至上海桑尼公司及申速生物技术有限公司直接测序，测序方法为Sanger末端终止法测序。测序结果分析，利用DNAMAN、Chromas软件将测序结果与GenBank：AF165426．1提供NF2基因序列进行比对，确定其突变形式。
　　 结果：
　　 OMEGA公司(D3399-01(50 Preps))DNA提取试剂盒，可以同时抽取外周血及石蜡标本基因组DNA，采用巢式PCR可以获得特异性单一条带。上海申速及桑尼公司测序，B1、B3、B9外周血样本及(4/7)肿瘤样本NF2基因，exon14与内含子14交界处第一个碱基位置，即剪接供体位点GT→CT杂合性碱基突变，在正常受试者同位点未见异常。
　　 结论：
　　 外周血样本B1、B3、B9及部分肿瘤组织(4/7)NF2基因，exon14与内含子14交界处第一个内含子位置，剪接供体位点GT→CT杂合性碱基突变。依据“GT-AG”法则，剪接供体位突变后，导致内含子部分不能正常切除，异常形成，最终导致merlin蛋白截短表达，失去正常的肿瘤抑制功能。回顾性分析该家系病例资料发现，具有相同基因型患者其表现型之间也可存在差异，该致病性突变在家系内稳定遗传。