Fezf2在胚鼠视网膜神经节细胞中的表达及其下游靶基因的鉴定

摘要

目的：哺乳动物大脑接受的信息80％来自于眼睛，而视觉神经系统则是连接大脑与眼睛的通路。在胚胎发育时期，视网膜神经节细胞(RetinalGanglionCells，RGCs)发出轴突投射到中脑的外侧膝状体(LGN)和上丘(SC)并与之形成联系。这种准确无误的投射主要受到轴突导向分子的调控。Fezf2是调控轴突导向的转录因子，调控大脑第五皮层大锥体神经元轴突的向下生长。但是Fezf2在视网膜中的表达及其作用还没有人报道。本研究尝试确定Fezf2是否在视网膜中表达情况，并在这之后进一步研究Fezf2是否对RGCs轴突生长有导向作用及具体的作用机制。
　　 方法：我们首先使用免疫荧光(IF)技术与原位杂交(ISH)技术来检验Fezf2在视网膜的表达情况。在确立表达之后，我们使用小鼠胚胎视网膜电转染的方法将Fezf2-pCLEG质粒转染进入胚胎13.5天(E13.5)小鼠的视网膜中，在胚胎16.5天(E16.5)时将转染的视网膜取出制备为单细胞悬液，通过流式细胞仪将转染的细胞分选出来，提取RNA进行定量PCR测定候选基因。候选基因的选取则依据文献己报道的在RGCs有表达的轴突导向分子。
　　 结果：1）我们发现Fezf2表达在胚胎期小鼠RGCs中，表达时间为胚胎16.5天。2)在11个基因当中，FoxG1和Tbx5在实验组和对照组中有4倍以上的表达差异；Pcdh19和Engrailed-2在实验组和对照组中有2倍以上的表达差异；FoxD1在实验组和对照组中有接近2倍的表达差异；其他基因在两组中的表达差异不明显、甚至是无差异。
　　 结论：在发育期小鼠视网膜中，Fezf2可能具有调控RGCs轴突导向生长的能力。其可能通过调控Pcdh19来影响RGCs轴突的生长；并且可能通过调控FoxG1、Tbx5、Engrailed-2和FoxD1来影响RGCs轴突向顶盖／上丘区域投射，从而影响项盖／上丘区域地形图的形成。