褪黑素干预大鼠胰腺炎线粒体膜电位及Caspase3的变化研究

摘要

目的：观察大鼠急性重症胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)胰腺组织损伤时腺泡细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential，△ψm)及caspase3表达的变化，探讨褪黑素(melatonin，MT)对大鼠急性重症胰腺炎胰腺损伤的保护作用。
　　 方法：
　　 1．取雄性SD大鼠48只，采用随机区组设计，随机分为假手术组(SO)、急性重症胰腺炎组(SAP)、褪黑素干预组(MT)。采取经胰管注射4％牛黄胆酸钠法制造大鼠重症胰腺炎模型，假手术仅开腹后翻动肠管，手术后每只大鼠皮下补充生理盐水2ml。
　　 2．造模成功后，分别于4h、10h时处死大鼠，各组各时点8只。于大鼠下腔静脉抽取6-8ml静脉血，2500rpm/min离心后留取上层血清，置-20℃冰箱保存备用。取新鲜胰腺组织，一部分固定于4％多聚甲醛液中，待行组织病理学检测；一部分置冻存管中于液氮中保存，进行realtime-PCR检测；另一部分新鲜组织进行体外消化为单细胞悬液，进行线粒体膜电位的检测。
　　 3．人工碘比色法检测血清淀粉酶(AMY)含量。
　　 4．苏木精-伊红染色观察胰腺病理变化，常规行病理学评分，流式细胞术检测不同时间段腺泡细胞线粒体膜电位变化，Realtime-PCR检测caspase3的表达。
　　 5．计量资料以(x±s)表示，应用SPSS13.0统计软件进行分析，进行正态性检验和方差齐性分析、完全随机设计单因素方差分析，结果以p＜0.05有统计学意义
　　 结果：成功建立大鼠SAP模型。
　　 1．血清淀粉酶
　　 同SO组比较，MT组与SAP组血清淀粉酶增高，差异有统计学意义（P＜0.05），模型制作成功；MT组血清淀粉酶各时点较SAP组相应时点均下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　 2．胰腺组织病理
　　 同SO组相比，MT组和SAP组胰腺组织均显示不同程度的病理损害。同SAP组相比，MT组胰腺组织病理损伤较SAP组相应时点减轻。
　　 3．线粒体膜电位
　　 同SO组相比，SAP组急性重症胰腺炎诱导后4h、10h线粒体膜电位明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；同SAP组相比，MT组4h、10h线粒体膜电位明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 4．caspase3mRNA表达
　　 与SO组相比，SAP组急性重症胰腺炎诱导4h、10h后caspase3mRNA相对表达量增多，差异有统计学意义（P＜0.05）；与急性重症胰腺炎组相比，褪黑素治疗组4h、10h后caspase3相对表达量增多，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 结论：褪黑素可促进急性重症胰腺炎线粒体膜电位的降低及caspase3的表达增多，诱导细胞凋亡，对急性重症胰腺炎有保护作用。