大黄素逆转胰腺癌耐药细胞株Panc--1对吉西他滨化疗耐药的机制

摘要

目的 探讨大黄素逆转人胰腺癌耐药细胞株Panc-1细胞对吉西他滨化疗耐药的作用及其可能的作用机制。 方法 胰腺癌耐药细胞株Panc-1分别经吉西他滨(20μmol/L，G组)、大黄素(80μmol/L，E组)以及大黄素(80μmol/L)联合吉西他滨(20μmol/L)(G+E组)作用24 h，同时设立空白对照组(C组)。分别应用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖；流式细胞计数法检测细胞凋亡；荧光定量PCR检测细胞中survivin、XIAP及Caspase-3、Caspase-9基因的变化；Western印迹检测细胞中survivin、XIAP及Caspase-3、Caspase-9相关蛋白的表达变化。 结果 吉西他滨(Gemcitabine)、大黄素(Emodin)及两者联合(Gemcitabine+Emodin)作用Panc-1细胞24h后，CCK-8法检测Panc-1细胞增殖率分别为(83.60±3.00)％、(66.30±3.54)％和(39.78％±2.00)％，与对照组(C组)相比，吉西他滨组(G组)和大黄素组(E组)均可抑制肿瘤细胞的增殖(P<0.05)，但联合用药组抑制肿瘤细胞增殖的作用更明显，与其他各组相比，统计学上均有显著性差异(P<0.05)。流式细胞计数法示：G组Panc-1细胞凋亡率较C组增多(P<0.05)，E组细胞凋亡率较C组和G组增多更明显(P<0.05)，而E+G组肿瘤细胞凋亡比其余各组均显著增多(P<0.05)。荧光定量PCR结果显示E组肿瘤细胞中survivin、XIAP基因的表达较C组显著降低(P<0.05)，Caspase-3、Caspase-9基因的表达较C组显著增高(P<0.05)；G组肿瘤细胞中survivin、XIAP基因的表达较C组显著增加(P<0.05)，Caspase-3、Caspase-9基因的表达较C组也增多(P<0.05)；而E+G组survivin、XIAP基因的表达较E组降低更明显，Caspase-3、Caspase-9基因的表达较E组增高更明显(P<0.05)。Westblot分析显示G组肿瘤细胞中survivin、XIAP、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达较C组显著增多(P<0.05)；E组组肿瘤细胞中survivin、XIAP蛋白的表达较C组显著降低(P<0.05)，Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达较C组显著增高(P<0.05)；而E+G组survivin、XIAP蛋白的表达较E组降低更明显，Caspase-3、Caspase-9基因的表达较E组增高更明显(P<0.05)。 结论 大黄素能显著增强吉西他滨对人胰腺癌耐药细胞株Panc-1细胞的增殖抑制作用，促进Panc-1细胞的凋亡，并且能显著逆转Panc-1细胞对吉西他滨的化疗耐药作用，其可能的作用机制是大黄素通过抑制Panc-1细胞中survivin、XIAP的表达，继而促进Caspase-9、Caspase-8的表达，进一步激活Caspase-3的表达，从而增强吉西他滨对Panc-1细胞的促凋亡作用，达到逆转Panc-1细胞对吉西他滨化疗耐药的作用。