榄香烯对人胃癌细胞SGC--7901的体外生长及CD44v6、CD44的影响

摘要

[背景] 胃癌是严重危害人类健康的常见恶性肿瘤，目前因为早期胃癌诊断率较低，确诊时已为中晚期，即使予以根治性切除，仍有较高的肿瘤复发及转移率。 肿瘤的侵袭和转移是一个极其复杂、多步骤的过程，包括癌细胞从原发部位脱落，结合并降解基底膜；癌细胞侵入血管、淋巴管；癌细胞在循环中运行和滞留；最后穿出血管、淋巴管并增殖形成转移灶。粘附分子是介导细胞与细胞间或细胞与基质问相互接触和结合的一类分子，参与肿瘤转移的过程。其中细胞粘附分子CD44、CD44v6发挥了重要作用，能促进恶性肿瘤细胞的侵袭和转移。 榄香烯是从姜科植物温郁金中提取的半萜烯类化合物，它的主要成分是β-榄香烯。榄香烯是我国自行开发研制的Ⅱ类广谱非细胞毒性抗肿瘤药，具有化疗增敏、逆转肿瘤多药耐药和提高机体免疫功能的作用，毒副作用轻微，在临床上已被广泛地应用于肿瘤疾病的治疗。榄香烯的抗肿瘤转移作用已被证实，其作用机制可能与抗血管形成相关，但关于榄香烯对细胞表面粘附分子的影响尚无报道。 [目的] 1、研究不同浓度榄香烯对人胃癌细胞株SGC-7901体外生长的影响； 2、榄香烯对人胃癌细胞株SGC-7901表面粘附分子CD44v6、CD44的影响，探讨榄香烯抗转移的机制是否与表面粘附分子CD44v6、CD44相关。 [方法] 1、复苏人胃癌SGC-7901细胞系，进行常规培养，并观察细胞生长状况。待细胞生长状态良好后，冻存部分细胞。用倒置显微镜观察不同浓度榄香烯(0、20、40、60μg/ml)对人胃癌SGC-7901细胞生长状态的影响，并拍照记录。 2、Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测不同浓度的榄香烯(0、10、20、30、40μg/ml)对SGC-7901细胞增殖的影响。 3、采用DAPI荧光染色法从形态学上观察不同浓度的榄香烯对人胃癌SGC-7901细胞凋亡情况的、影响，并拍照记录。 4、流式细胞仪检测不同浓度的榄香烯(0、10、20、30、40μg/mL)对细胞膜表面CD44v6、CD44表达的影响。 [结果] 1、常规培养人胃癌SGC-7901，状态良好。细胞生长速度较快，3天左右即可传代一次。取对数生长期细胞予以冻存。加药组细胞在倒置显微镜下观察：20μg/ml榄香烯组与未加药组相比，细胞形态、大小未见明显区别，但可见细胞增殖缓慢，细胞数量少于未加药组。40μg/ml榄香烯组贴壁细胞明显减少，细胞皱缩或肿胀，悬浮及死细胞增加。60μg/ml榄香烯处理SGC-7901细胞24h后贴壁细胞明显减少，培养液中见死细胞及细胞碎片等。 2、CCK-8法检测结果显示：与未加药组相比较，10μg/m1、20μg/ml、30μg/ml、40μg/m1榄香烯在各时间段(加药后24h、48h、72h)均对SGC-7901细胞有明显抑制作用，呈现时间及浓度依赖性。 3、DAPI荧光染色进一步从形态学上证明榄香烯能诱导SGC-7901细胞凋亡各浓度梯度榄香烯处理SGC-7901细胞48h后，未加药组SGC-7901细胞细胞核体积、形态正常，染色均匀，10μg/ml组细胞内部分染色质出现浓缩，边缘化；20μg/ml组的细胞数减少，细胞核染色质浓缩；30μg/ml与40μg/ml榄香烯处理组出现明显凋亡，细胞核碎裂，形态不规则，可见典型的凋亡小体及多个细胞核碎片等。 4、流式细胞仪结果显示：经10μg/ml榄香烯处理的SGC-7901细胞CD44v6表达率还不能认为与对照组有区别(P>0.05)，其余榄香烯处理组细胞CD44v6表达率均高于对照组并呈现浓度依赖性(P<0.01)；其余榄香烯处理组细胞CD44表达率与对照组细胞无显著差异(P>0.05)。 [结论] 榄香烯能抑制SGC-7901细胞增殖、诱导细胞凋亡，其抗肿瘤转移的机制可能与下调CD44v6表达相关。