血管内皮生长因子165基因对人胃癌细胞在体外生长及其受体表达的影响

摘要

目的:将已构建的重组腺病毒Ad-VEGF165进行扩增和纯化并观察其对人胃腺癌细胞(BGC-823)在体外生长及其受体表达的影响.方法:以人胚肾293细胞对重组腺病毒Ad-VEGF165和对照病毒Ad-GFP进行包装、扩增后感染BGC-823细胞,应用MTT比色法分析VEGF165对该种细胞体外生长的影响,并以免疫细胞化学方法检测该种细胞VEGFR-2的表达情况.结果:成功扩增及纯化了重组腺病毒Ad-VEGF165及对照病毒Ad-GFP,获得约3.2×1013pfu/L滴度的重组腺病毒和2.0×1013pfu/L滴度的对照病毒.当感染复数(MOI)为20时转导率即接近100%而无明显细胞中毒现象.MTT结果显示Ad-VEGF165组吸光度明显高于Ad-GFP组(24h:0.960±0.01vs0.737±0.01,P<0.01;48h:1.321±0.03vs0.981±0.02,P<0.01;72h:1.663±0.03vs1.207±0.01,P<0.01)及对照组(24h:0.960±0.01vs0.724±0.03,P<0.01;48h:1.321±0.03vs0.968±0.01,P<0.01;72h:1.663±0.03vs1.185±0.02,P<0.01).另外,在该细胞株上检测到了VEGFR-2的表达,且在Ad-VEGF165组其表达明显高于Ad-GFP组(62.5%vs37.6%,P<0.01)和对照组(62.5%vs34.1%,P<0.01).结论:VEGF对胃癌细胞有直接的促生长作用,并可上调其主要受体VEGFR-2的表达水平,从而进一步证实了VEGF对胃癌细胞的自分泌作用.