引起儿童BSI和SSTI的金葡菌的毒力基因谱及分子特征研究

摘要

目的:金黄色葡萄球菌(SA)，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)，能够引起广泛的感染，包括皮肤软组织感染、呼吸机相关性感染、肺炎、化脓性关节炎、心内膜炎、骨髓炎、败血症及血流感染。本研究旨在观察儿童血流和皮肤、软组织感染的金葡菌的毒力基因谱以及分子特征。
　　 方法:收集金黄色葡萄球菌71株，分别分离自江西省儿童医院（69株）及温州医学院附属第一医院（2株）2010年1月至2010年12月，0-7岁儿童血流感染及皮肤、软组织感染的菌株。其中41株分离于血流感染(BSI)细菌，30株分离于皮肤、软组织感染细菌。纳入标准:出现红斑、肿胀，局部疼痛，白细胞增高、和或发烧。纳入研究后的金黄色葡萄球菌采用革兰氏染色、过氧化氢酶实验、凝固酶试验和Vitek微生物分析仪(bioMe'rieu，Marcy1，Etoile，France)进行分离和鉴定，金黄色葡萄球菌ATCC25923作为质控菌株。PCR方法检测金黄色葡萄球菌毒力基因。金黄色葡萄球菌临床分离株的毒力基因和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的SCCmec基因分型采用多重PCR。应用多位点基因序列分型(MLST)技术和葡萄球菌A蛋白序列分析(spa typing)分型对金黄色葡萄球菌株进行序列分型。
　　 结果:
　　 1.mecA和pv1基因的检测:71株金黄色葡萄球菌中，16株mecA为阳性，被判断为MRSA，其阳性率为22.5％(16/71)。16株MRSA中，10株为血流感染(BSI)菌株，MRSA检出率为24.4％(10/41);6株为皮肤软组织感染(SSTI)菌株，MRSA的检出率为20.0％(6/30)。在30株SSTI株中，26株为pv1基因阳性，阳性率为86.7％(26/30);在41株BSI株中，21株Pv1阳性，阳性率为51.2％(21/41)。SSTI菌株的Pv1阳性率明显高于BSI菌株。
　　 2.毒力基因谱:71株被检测菌株中，45株(63.4％，45/71)携带≥10个毒力基因、其中23株(76.7％，23/30)为SSTI菌株，22株(53.7％，22/41)为BSI菌株;每株至少携带一种肠毒素基因。除了arcA、tst和see检出率为0外，icaA、sdrC、h1a、h1b、c1fA、seb、seg和sei等8个基因的检出率≥75％，而eta、etb、sea、sec、sed、seh和sej等7个基因的检出率≤25％。与BSI菌株相比，SSTI菌株的h1a、h1b、cna、c1fA、seb、sec和pv1基因的检出率更高，而eta、etb和sea的检出率相对较低。所有SSTI菌株没有检出etb,sea和seh，这三种基因只在BSI菌株中被检测出。
　　 3.SCCmec分型:16株MRSA中，1株为SCCmecⅡ，占6.25％(1/16);2株为SCCmecⅢ，占12.5％(2/16);5株为SCCmecⅣ，占31.25％(5/16);8株为SCCmecV，占50％(8/16)。
　　 4.MLST分型:在71株被测菌株中，共检测出34种ST型，其中最常见的序列型为ST120(11.3％，8/71)和ST25(11.3％，8/71)，其次ST121(9.9％7/71)、ST88(8.5％,6/71)、ST59(8.5％6/71)和ST6(7.0％,5/71), ST15和ST188分别占3株和2株。在检测的34种ST型中，14种ST型为首次发现的新ST型，分别为ST2201、ST2202、ST2203、ST2204、ST2206、ST2207、ST2208、ST2209、ST2210、ST2211、ST2212、ST2213、ST2214和ST2424。除ST2424株为SSTI株外，其余13种新型ST型菌株全部为BSI株。BSI株中共发现30种ST型，而SSTI株中只发现9种，且ST6(5株)只在BSI株中被发现，而ST121（7株）只在SSTI株中被发现。
　　 5.spa分型:在71株菌株中共检测到36种spa型，其中4种是首次发现的spa型，分别为t9518，t10738，t10739和t10740。t437是最常见的spa型，占14.1％（10株），其次是t159占12.7％（9株），t189占7％（5株）和t349占5.6％（4株）;其他spa型占1-3株。t437和t189是BSI菌株中最常见的spa型，且所有的t189菌株都来自BSI菌株，而t159是SSTI菌株中最常见的spa型。16株MRSA中，5株为MRSA-ST59-SCCmecⅥ/Ⅴ-t437-pv1(+)，4株为SSTI菌株，1株为BSI菌株。在55株MSSA中，ST25是最常见的spa型，占14.5％（8株），其次是ST120和ST121，各占12.7％（7株）。
　　 结论:
　　 1.引起儿童血流和皮肤软组织感染的金黄色葡萄球菌所携带的毒力基因检出率高，特别是SSTI株。
　　 2.引起儿童血流和皮肤软组织感染的金黄色葡萄球菌具有不同的分子特征。

目录

摘要

缩略词表

前言

材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

结果

1．mec和pv1基因的检测

2．毒力基因谱

讨论

参考文献

附录

致谢

综述 金黄色葡萄球菌杀自细胞素研究进展

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