目的:为了解决供体肝脏的短缺和免疫排斥反应这限制肝移植发展的两大主要问题，本研究试探求一种以去细胞化支架为基础的全肝脏三维灌流生物反应系统来诱导分化培养干细胞，最终朝着全肝脏再生的方向发展的途径。通过建立一种新型的去细胞化流程，完善的评价其去细胞化效果。将之与自行设计的全肝脏三维灌流生物反应系统结合，初步探索诱导分化培养干细胞的可行性。 方法:本研究采用以3％Triton-X100为主，辅助以SDS、酶学法、物理冻融法、高低渗法等方法的新型全肝脏去细胞化流程制作大鼠全肝脏去细胞化支架，进行大体组织学观察，免疫组化法检测支架的胶原蛋白，层粘连蛋白，纤粘连蛋白等细胞外支持基质的分布，电镜观察支架内部形态结构的状态，ELISA法检测HGF、VEGF细胞因子的含量，吸光度法检测氨基聚糖、总胶原蛋白及DNA的含量;与SF.Badylak et al去细胞化流程比较，Western-blotting法检测供体细胞组分GAPDH、MCH-Ⅰ及HMGB-1的残留量。向自行设计的全肝脏三维灌流生物反应系统内的支架上回填WBF-344卵圆细胞，并以含10％胎牛血清及3.75 mmol/ml丁酸钠的诱导培养液诱导WBF-344卵圆细胞向肝细胞方向分化，组织学和免疫荧光法检测支架细胞诱导分化过程。 结果:光镜下，新型去细胞化流程完全去除了供体细胞成分，很好的保留了胶原蛋白，层粘连蛋白，纤粘连蛋白等细胞外三维结构，氨基聚糖、HGF、VEGF等细胞外基质保存量分别达正常组织的90％及40％;基本去除残留DNA的同时，相比SF.Badylak et al去细胞化流程，细胞残留组分量如GAPDH、MCH-Ⅰ及HMGB-1明显下降，仅正常组织的10％;WBF-344细胞在支架培养系统内生长良好，白蛋白表达逐渐增强。 结论:本研究成功构建了新的较完善的去细胞化支架制作与评价体系，新型去细胞化流程在达到目前最好的细胞外基质保留量的前提上，进一步清除干净了一些对细胞体外生长和未来移植回体内后有影响的供体细胞残留组分，并通过初步的诱导分化培养，为干细胞分化在肝脏疾病治疗找到以一种新的应用模式。 展开▼
