利用去细胞化天然肝脏支架构建新型门静脉植入型组织工程肝脏的实验研究

摘要

目的:为解决目前肝脏组织工程研究中肝细胞可植入量不足和移植后肝细胞血供不足的问题,利用去细胞化天然肝脏支架初步构建新型门静脉植入型组织工程肝脏(Tissue engineering liver,TEL).rn 方法:获取Lewis大鼠肝脏右中叶,通过预留门静脉交替灌注离子型和非离子型去垢剂完成肝脏去细胞化,获得天然去细胞化肝脏支架.利用层层自组装(LbL)技术对所获肝脏支架进行内表面肝素抗凝修饰.然后将天然肝脏支架与经过24小时摇动培养形成的Lewis大鼠原代肝细胞球进行复合培养,构建完成门静脉植入型TEL.测定TEL和天然肝脏中的DNA含量,计算TEL中肝细胞量.最后将构建完成的TEL植入90％肝切除Lewis大鼠爆发性肝衰模型门静脉系统中,检验TEL体内肝功能发挥和治疗情况.rn 结果:通过灌注去细胞化过程获得具有完整三维结构，同时保留肝脏原有血管系统的肝脏支架。经过LbL支架内表面肝素抗凝修饰，天然肝脏支架在接入大鼠血液循环系统后未出现凝血和血栓。与原代大鼠肝细胞球复合培养，肝细胞在支架内部贴附生长。天然支架内部能容纳大鼠天然肝脏10%的肝细胞量。完成TEL构建后，TEL可成功植入大鼠门静脉系统中。植入大鼠门静脉系统的TEL，其内部肝细胞均处于门静脉血液灌流中，可表达多种肝脏特异性功能基因，合成白蛋白和糖原;TEL可暂时降低爆发性肝衰模型大鼠血氨浓度，使其生存时间由16小时延长至72小时。rn 结论:利用去细胞化天然肝脏支架成功构建了新型门静脉植入型TEL。它可能成为一种潜在的肝移植替代疗法。