沉香化气胶囊促肠动力机制研究

摘要

第一部分:沉香化气胶囊对糖尿病大鼠小肠ICC、肌间神经丛、CBS的作用　　目的:探讨沉香化气胶囊对糖尿病(diabetesmellitus,DM)大鼠小肠Cajal间质细胞(interstitialcellsofCajal,ICC)、肌间神经丛、胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)的影响。　　方法:将健康雄性SD大鼠分为正常对照组、DM模型组、DM模型+中药组。大鼠一次性腹腔注射(ip)链脲佐菌素(STZ,60mg/kg)造模,选取成功模型,DM模型+中药组每天给予中药灌胃,模型组和正常对照组每天给予同等容量的蒸馏水,持续灌胃4周.。所有大鼠干预4周结束后。给予印度墨汁灌胃测定小肠传输速率,利用免疫组织化学和图像分析观察十二指肠c-Kit、蛋白基因产物9.5(proteingeneproduct9.5,PGP9.5)、神经微丝蛋白(neurofilamentprotein,NFP)、CBS的表达。　　结果:灌胃4周,DM模型+中药组小肠传输速率均比DM模型组明显增加(71.26±5.22vs45.52±6.42,P<0.01),仍低于对照组(71.26±5.22vs80.40±7.33,P<0.05);DM模型+中药组c-Kit、PGP9.5、NFP的阳性产物面积和吸光度值均比DM模型组明显增加(443.28±24.40vs358.83±35.03,889.17±82.75vs445.17±64.06,276.20±63.41vs182.90±65.21,0.16±0.02vs0.13±0.02,0.24±0.02vs0.15±0.01,0.17±0.01vs0.13±0.01,均P<0.01),仍低于正常对照组(443.28±24.40vs557.28±42.35,P<0.01;889.17±82.75vs1050.50±90.22,P<0.01;276.20±63.41vs415.40±74.24,P<0.01;0.16±0.02vs0.18±0.02,P<0.05;0.24±0.02vs0.27±0.02,P<0.01;0.17±0.01vs0.21±0.02,P<0.05)。然而DM模型+中药组组CBS的阳性产物面积和平均吸光度值均比DM模型组低(417.03±53.76vs484.20±77.80,P<0.01;0.20±0.03vs0.27±0.03,P<0.01),却高于正常组(417.03±53.76vs340.57±78.23,P<0.01;0.20±0.03vs0.14±0.03,P<0.05)。　　结论:沉香化气胶囊促进糖尿病大鼠小肠肌间神经丛c-Kit、PGP9.5和NFP的表达,降低CBS的表达,提示对受损的DM大鼠小肠ICC、肌间神经丛及气体递质H2S的生成紊乱有部分恢复作用,从而对糖尿病大鼠的肠动力障碍有一定的改善效应。　　第二部分:突触在沉香化气胶囊改善糖尿病大鼠肠动力中的作用　　目的:探讨沉香化气胶囊对糖尿病(diabetesmellitus,DM)大鼠小肠突触素(synaptophysin,Syn)表达的影响。　　方法:将健康雄性SD大鼠分为正常对照组、DM模型组、DM模型+中药组.大鼠一次性腹腔注射(ip)链脲佐菌素(STZ,60mg/kg)造模,选取成功模型,DM模型+中药组每天给予中药灌胃,模型组和正常对照组每天给予同等容量的蒸馏水,持续灌胃4周。所有大鼠干预4周结束后,给予印度墨汁灌胃测定小肠传输速率,利用免疫组织化学和图像分析观察十二指肠突触素的表达,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot分别检测了三组小肠肌间神经丛中SynmRNA和蛋白的表达量,以恒定表达的β-actin作为内参照。分别计算SynmRNA与β-actinmRNA、Syn蛋白与β-actin蛋白表达积分光密度值的比值(syn/β-actin),以反映组织中SynmRNA和蛋白的相对表达量。　　结果:(1)灌胃4周后,DM模型+中药组小肠传输速率均比DM模型组明显增加(71.26±5.22vs45.52±6.42,P<0.01),仍低于对照组(71.26±5.22vs80.40±7.33,P<0.05);(2)免疫组化结果显示DM模型+中药组突触素的阳性产物面积和平均吸光度值均比DM模型组明显增加(832.33±58.78vs488.83±58.56,0.25±0.02vs0.16±0.01,P<0.01),仍低于正常对照组(832.33±58.78vs937.67±101.23,P<0.05,0.25±0.02vs0.29±0.03,P<0.01)。(3)RT-PCR研究结果显示DM+中药组SynmRNA表达显著强于DM组,DM+中药组syn/β-actin比值明显较DM组增加(0.107±0.010vs0.085±0.011,P<0.05),但仍低于正常组(0.107±0.010vs0.255±0.011,P<0.05)。(4)westernblot研究结果显示DM+中药组的Syn蛋白表达也较模型对照组明显增强,两组间syn/β-actin比值比较有显著性意义(0.418±0.026vs0.330±0.023,P<0.01),但仍低于正常组(0.418±0.026vs0.518±0.044,P<0.01)。　　结论:沉香化气胶囊促进糖尿病大鼠小肠肌间神经丛突触素的表达,提示对受损的DM大鼠小肠突触可能有部分恢复作用,从而对糖尿病大鼠的肠动力障碍有一定的改善效应。

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第一部分 沉香化气胶囊对糖尿病大鼠小肠ICC、肌间神经丛、CBS的作用

1 引言

2 材料和方法

3 结果

4 讨论

5 结论

6 参考文献

第二部分 突触在沉香化气胶囊改善糖尿病大鼠肠动力中的作用

1 引言

2 材料和方法

3 结果

4 讨论

5 结论

6 参考文献

小结

本实验存在的不足之处及努力方向

附录

致谢

综述