新疆维吾尔族HLA-DRB1、-DQA1基因多态性与乙型肝炎病毒感染结局相关性研究

摘要

研究背景:　　乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的发生、发展和转归是由机体抗病毒免疫功能及病毒逃避免疫攻击反应的能力决定,从隐匿性感染、急性肝炎、慢性肝炎乃至肝硬化和肝癌,形成复杂的疾病谱,其原因除了与HBV株毒力、致病性等有关外,更重要的是宿主的免疫遗传背景对HBV感染所发生的免疫反应不同,而人类白细胞抗原(human lymphocyte antigen,HLA)是决定人类免疫应答能力最重要的遗传因素,特别是免疫活性细胞上的HLA具有向抗原特异性T细胞受体传递抗原多肽的生物学特性,HLA分子在抗原识别、免疫应答和免疫调控,破坏外来抗原靶细胞方面与抗HBV免疫反应有着密切的关系,可能影响着HBV感染的慢性化和免疫反应的强弱。越来越多的研究表明,影响HBV感染免疫应答过程主要取决于HLA-II类基因多态性,HLA-II基因与HBV的易感或抗性相关,决定着HBV感染的预后。因此,HLA-II基因位点被看作与HBV感染相关基因,目前研究热点主要集中在DR和DQ亚区。　　在我国乙型肝炎是一种最常见的感染性疾病,现有慢性HBV感染者约9300万人,其中慢性乙型肝炎患者约2000万例,其发病率有明显的地区性、种族差异性。近年来,关于HLA多态性与HBV感染的相关性研究成为国内外肝病界研究热点,已在不同地区人群展开,并取得一些进展,但结果存在明显地域性及种族差异性。不同种族之间HLA等位基因频率具有明显差异性,因此,对新疆维吾尔族进行HLA基因频率分布研究还是有意义的,寻找新疆维吾尔族HBV感染者的遗传易感基因、抗性基因,对临床判断HBV感染的转归和预后,开展个体化治疗及预防复发具有重要意义。　　目的:　　研究新疆地区维吾尔族乙型肝炎病毒(HBV)感染后不同结局者人类白细胞抗原(HLA)-DRB1、-DQA1等位基因频率分布,探讨新疆维吾尔族HLA-DRB1、-DQA1区基因多态性与HBV感染临床转归及HBV不同复制状态的相关性。　　方法:　　本研究采用候选基因策略,应用病例-对照研究方法。病例组选自2010年4月~2011年3月我院感染科门诊及住院的知情同意患者,慢性乙型肝炎患者(CHB组)70例, HBV携带者(携带组)46例,均为无血缘关系的新疆地区维吾尔族人;对照组选取同一时期无血缘关系的新疆地区维吾尔族健康献血者(健康组)80例, HBV感染后自然恢复者(恢复组)42例,共四组人群,同时收集外周血留取标本:　　1)使用酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测乙肝病毒相关抗原抗体系统(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc);　　2)运用PCR-荧光探针法测定血清HBV核酸定量,分析四组人群HBV-DNA动态变化;　　3)应用序列特异性引物-聚合酶链反应(polymerase chain reaction-sequence specific primers,PCR-SSP)技术对血样标本进行HLA-DRB1、-DQA1等位基因分型比较,并比较HBV不同复制状态下DRB1、DQA1多态性的分布频率及其差异;　　4)将HLA-DRB1、-DQA1等位基因PCR扩增后的阳性结果进行纯化并测序,结果经BLAST基因服务站进行同源性论证分析。　　结果:　　1)HBV感染后自然恢复者组与健康献血者组HLA-DRB1*0701等位基因频率分别为13.09％和13.75%,明显高于慢性乙型肝炎组5.71%及HBV携带者4.35%,差异有统计学意义(χ2=4.06、6.03,P<0.05,OR=0.36、0.34;χ2=4.75、6.31,P<0.05;OR=0.27、0.25);HBV感染后自然恢复者组DRB1*1201-3等位基因频率16.67%,高于慢性乙型肝炎患者组7.86%,差异有统计学意义(χ2=4.70、P<0.05,OR=0.37);DRB1*1301-2基因在健康献血者组和HBV感染后自然恢复者组的频率分别9.38%、10.7%,显著高于慢性乙型肝炎组,差异有统计学意义(χ2=14.58、13.54,P<0.01);　　2)HBV感染后自然恢复者组与健康献血者组HLA-DQA1*0102等位基因频率分别为23.81%和22.50%,明显高于慢性乙型肝炎组10.00%及HBV携带者8.69%,差异有统计学意义(χ2=9.47、10.50,P<0.01,OR=0.28、0.31;χ2=9.25、9.79,P<0.01,OR=0.23、0.26);HLA-DQA1*0501在HBV携带者组等位基因频率21.39%,高于健康献血者组13.13%,差异有统计学意义(χ2=3.95、P<0.05,OR=2.16);慢性乙型肝炎组HLA-DQA1*0501等位基因频率27.14%,显著高于HBV感染后自然恢复者组15.48%与健康献血者组13.13%,差异有统计学意义(χ2=5.76,P<0.01,OR=2.65;χ2=12.30,P<0.01,OR=3.34);　　3)其他各等位基因频率在各组间差异无统计学意义;HBV不同复制状态HLA-DRB1、-DQA1等位基因分布频率差异无统计学意义(P>0.05)。　　结论:　　新疆维吾尔族人群中携带HLA-DQA1*0501等位基因者感染HBV后可能增加慢性乙肝发生的风险,而携带HLA-DRB1*0701、DRB1*1201-3、DRB1*1301-2、HLA-DQA1*0102者可能降低慢性乙肝发生的风险。

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英文缩略表（abbreviations）

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英文摘要

1 前言

2 材料和方法

2.1材料

2.2 方 法

2.2.1 标本采集及血样处理

2.2.2 血清学检测

2.2.3 HLA-DRB1、-DQA1等位基因的检测

2.3统计数据处理

3 结果

3.1研究对象基本特征

3.2 HLA-DRB1、-DQA1区各5个等位基因在4组研究对象的电泳图谱

3.3 测序结果

3. 4 HLA-DRB1、-DQA1基因多态性与HBV感染结局的关联

3.4.1 HLA-DRB1、-DQA1区等位基因在4组不同人群的频率分布

3.4.2 HLA-DRB1和-DQA1区等位基因分布频率在病例组与对照组人群之间进行两两比较

4 讨论

4.1 HLA与HBV感染免疫损伤的相关性机制

4.2 HLA与疾病相关性的研究方法

4.3 新疆地区维吾尔族对照组人群HLA-DRBl、-DQAl等位基因多态性分析

4.4 HLA-DRBl 、-DQAl基因多态性与HBV感染结局的关联研究

4.4.1 HLA-DRBl 、-DQAl基因多态性与自限性HBV感染的关系

4.4.2 HLA-DRBl 、-DQAl基因多态性与慢性乙肝的关系

4.5 HLA-DRBl、-DQAl基因多态性与HBV复制状态的关系

5 结论

6研究工作的进一步设想

参考文献

附录

致谢

综述