miR-543在胶质瘤中的表达及其生物学功能研究

摘要

第一部分 miR-543在人脑胶质瘤细胞系及组织中的表达及意义
　　背景与目的：研究显示miR-543在肝癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤中表达异常，调控肿瘤细胞的多种恶性生物学行为，但在胶质瘤中的生物学作用及相关机制尚未见报道。本研究以 miR-543为研究对象，探索其在胶质瘤发生、发展中的潜在生物学作用。
　　方法：运用荧光定量PCR检测6株胶质瘤细胞系（U87、U251、U343、A172、T98G、LN229）和人星形胶质细胞（NHA）中miR-543的表达水平；检测62例胶质瘤组织和10例正常脑组织中miR-543的表达水平。
　　结果：与NHA相比，胶质瘤细胞系中miR-543表达水平均显著下调；与正常脑组织相比，胶质瘤组织中miR-543表达水平显著下调；差异均具有统计学意义（P<0.01)。Spearman等级相关分析显示miR-543表达水平与病理级别呈负相关， r=-0.827(P<0.001)。
　　结论：miR-543可能在胶质瘤的发生发展中扮演着抑癌基因的角色。
　　第二部分 miR-543影响人脑胶质瘤细胞生物学功能的体内外研究
　　背景与目的：前述结果显示 miR-543在人脑胶质瘤细胞系及胶质瘤组织中表达显著降低，可能在胶质瘤的发生发展中扮演着抑癌基因的角色。本部分进一步进行体外和体内实验，以阐明miR-543在胶质瘤中的生物学功能。
　　方法：将miR-543 mimic和阴性对照miR-NC mimic转染至胶质瘤细胞U87及U251中，运用实时荧光定量PCR检测转染效率。通过CCK-8试剂盒、平板克隆形成实验、PI单染流式细胞仪、Annexin V-PE/7-AAD双染流式细胞仪、划痕实验、Transwell侵袭实验来探索 miR-543在胶质瘤细胞中的生物学功能。用裸鼠皮下移植瘤模型研究miR-543在体内对胶质瘤的作用。
　　结果：过表达miR-543可显著抑制U87、U251细胞的增殖能力及细胞平板克隆形成能力，明显促进胶质瘤细胞凋亡，阻滞胶质瘤细胞在S期，抑制胶质瘤细胞的迁移及侵袭特性。裸鼠致瘤实验发现与U87-miR-NC组及U251-miR-NC组相比，接种U87-miR-543组及U251-miR-543组细胞的裸鼠皮下移植瘤生长速度慢，体积小，重量轻，差异具有统计学意义（P﹤0.01），表明过表达miR-543可显著抑制U87、U251细胞体内增殖能力。
　　结论：miR-543在胶质瘤形成、发展中发挥了肿瘤抑制作用，有可能成为胶质瘤治疗的一个有潜力的靶点。
　　第三部分 miR-543影响胶质瘤细胞中蛋白质的组学分析
　　背景与目的：肿瘤的分子生物学机制都是涉及成百上千个蛋白活动的过程。蛋白质组学分析是一个能同时研究大量蛋白质及其表达变化的方法。本部分研究拟通过label-free定量蛋白质组学方法研究胶质瘤细胞中 miR-543介导的与恶性肿瘤发生发展相关的蛋白质表达情况。
　　方法：应用 lable-free定量蛋白质组学技术鉴定 U87-miR-543和阴性对照U87-miR-NC的蛋白质表达情况；针对鉴定出的所有蛋白进行GO注释，对差异蛋白的pathway进行富集分析。
　　结果：U87-miR-NC、U87-miR-543两个样品合并后共鉴定到2446个蛋白质。过表达miR-543后339个蛋白质被鉴定为差异表达，其中，165个蛋白上调，174个蛋白下调。将miR-543相关蛋白按其在细胞所处的位置、参与的生物过程及其分子功能三个方面进行GO功能学分类。KEGG信号通路的富集分析显示磷酸肌醇代谢信号通路等多个信号通路显著参与miR-543介导的肿瘤发生发展。
　　结论：蛋白质组学分析显示了与miR-543相关的差异表达蛋白质，miR-543有可能成为未来胶质瘤治疗新的有潜力的靶点。

目录

声明

前言

参考文献

第一部分 miR-543在人脑胶质瘤细胞系及组织中的表达及意义

引言

材料和方法

结果

讨论

本章小结

参考文献

第二部分 miR-543影响人脑胶质瘤细胞生物学功能的体内外研究

引言

材料和方法

结果

讨论

本章小结

参考文献

第三部分 miR-543影响胶质瘤细胞中蛋白质的组学分析

引言

材料和方法

结果

讨论

本章小结

参考文献

全文小结

攻读博士期间公开发表的论文

综述:miRNA与胶质瘤的研究进展

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