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摘要
1 引言
1．1长链非编码RNA介绍
1．2 lncRNA的分类、起源和功能
1．2．2 lncRNA的起源
1．2．3 lncRNA的功能
1．3 lncRNA作用机制
1．3．1 lncRNAs调节染色质重塑
1．3．4 lncRNAs调节蛋白质功能与定位
1．4 lncRNA的筛选
1．5 lncRNA与脂质代谢
1．5．1 lncRNAs调节肝脏中的脂质代谢
1．5．2 lncRNAs调节脂肪形成
1．5．3 lncRNA与动脉粥样硬化
1．5．4 lncRNA与胰岛素抵抗
1．6 lncRNA的研究展望
1．7胆固醇代谢与代谢性疾病
2实验材料
2．1试剂
2．2菌株与质粒
2．3抗体
2．4细胞培养
2．5相关试剂盒
2．6小鼠
3实验方法
3．1 lncRNA的筛选
3．2构建质粒
3．2．1 引物设计
3．2．2质粒的构建
3．3质粒中抽
3．4细胞培养
3．5细胞转染
3．6蛋白抽提
3．7蛋白免疫印迹杂交(Western Blot)
3．8免疫荧光染色
3．9 RNA抽提
3．10逆转录反应
3．11实时定量PCR
3．12稳定表达细胞株的建立
3．13 MTT检测
3．14线粒体膜电位检测
3．15 ATP检测
3．16活性氧检测
3．17电镜样品制备
3．18腺相关病毒包装
3．18．1腺相关病毒的质粒构建
3．18．2腺相关病毒的包装
3．18．3腺相关病毒的纯化
3．19葡萄糖耐量(GTT)和胰岛素耐量(ITT)试验
3．20代谢笼试验
3．23 ORO染色
3．24冰冻切片
4实验结果
4．2 lncRNA在细胞上的功能
4．2．1 P5．3对线粒体功能的影响
4．2．2 P5．3对细胞代谢的影响
4．3 lncRNA在动物上的功能
4．3．1 P5．3对小鼠代谢的影响
4．3．2P5．3可抑制饮食诱导的胰岛素抵抗
5总结讨论
参考文献
附录
致谢
