海带多糖硫酸化修饰及修饰产物对oxLDL诱导巨噬细胞源性泡沫化细胞形成的影响

摘要

海带是一种重要的海产资源，富含生物活性大分子多糖，具有抗免疫调节，抗肿瘤，抗凝血和预防动脉粥样硬化的医学功效。近几年研究发现，硫酸化修饰可改良多糖的生物活性，而巨噬细胞泡沫化常出现在动脉粥样硬化发生的初期。本文主要开展了海带多糖(LJP61A)硫酸化修饰及修饰产物对oxLDL诱导巨噬细胞源性泡沫化细胞形成的影响研究，现取得的研究结果如下:
　　(1)通过水提醇沉法从海带中提取海带粗多糖，使用DEAE-Cellulose离子交换和Sephacryl S-500凝胶渗透两种色谱技术对海带粗多糖进行分离纯化，得到均一组分多糖LJP61A，分子量为1.96×106Da，并对LJP61A进行脱硫酸反应，获得DS-LJP。运用氯磺酸吡啶法(CSA-Pyr)对海带多糖均一组分进行硫酸化修饰，设置不同反应时间，得到了三种不同取代度的海带多糖硫酸化衍生物:SLJP-1，SLJP-2，SLJP-3，硫酸根取代度分别为:1.06、1.28和1.56。高效液相法测定其分子量分别为1.05×107Da、1.87×107Da和2.36×107Da。
　　(2)DS-LJP，SLJP-1，SLJP-2，SLJP-3对oxLDL诱导巨噬细胞源性泡沫化形成的抑制作用及调控机制:研究海带多糖硫酸化衍生物干预oxLDL诱导RAW264.7细胞泡沫化模型发现，浓度为25ug/mL的多糖硫酸化衍生物SLJP-1，SLJP-2，SLJP-3可以明显减少细胞内的脂质聚集，其中SLJP-3效果最为明显。海带多糖经过硫酸化之后获得硫酸化衍生物SLJP-1，SLJP-2和SLJP-3，均有不同程度的抗oxLDL诱导的RAW264.7细胞泡沫化特性，尤以SLJP-3的抗巨噬细胞泡沫化效果最为显著。结合RT-PCR和Western bolt实验结果，可以推测，海带多糖硫酸化衍生物SLJP-3可能是通过下调细胞中的TC含量，下调促炎相关细胞因子TNF-α，IL-6，IL-1β以及上调抑炎因子IL-10的释放，干预MAPKs信号通路，对细胞炎性的发展起到一定的抑制作用，进而抑制oxLDL诱导巨噬细胞源性泡沫化细胞的形成。

目录

声明

致谢

摘要

缩写词简表

第一章 绪论

1．1 多糖硫酸化修饰及生物活性的研究概况

1．1．1 多糖硫酸化修饰方法

1．1．2 硫酸化多糖生物活性研究进展

1．2 动脉粥样硬化发生的机制及研究进展

1．2．1 TLRs受体对动脉粥样硬化的影响研究

1．2．2 改性低密度脂蛋白对动脉粥样硬化的作用

1．2．3 氧化应激对动脉粥样硬化的影响

1．2．4 高血糖和胰岛素抵抗对动脉粥样硬化的影响

1．2．5 高血压对动脉粥样硬化的作用

1．3 中药成分的抗动脉粥样硬化活性研究概况

1．3．1 黄酮类

1．3．2 多酚类

1．3．3 生物碱类

1．3．4 多糖类

1．4 论文研究内容及主要技术路线

1．4．1 研究主要内容

1．4．2 研究技术路线图

第二章 材料与方法

2．2 主要试剂

2．3 主要仪器

2．4 实验方法

2．4．1 海带多糖的提取

2．4．2 海带多糖的分离纯化

2．4．3 海带多糖的硫酸化修饰

2．4．4 海带多糖硫酸化衍生物的抗动脉粥样硬化活性研究

2．5 数据收集与统计分析

第三章 结果与分析

3．1 海带多糖脱硫酸反应及硫酸化取代度的测定

3．1．2 反应时间对海带多糖DS-LJP取代度的影响

3．1．3 海带多糖SLJP-1、SLJP-2和SLJP-3的分子量测定

3．1．3 海带多糖硫酸化衍生物的分子量分析

3．2 硫酸化衍生物干预oxLDL诱导巨噬细胞源性泡沫化细胞的影响研究

3．2．1 海带多糖硫酸化衍生物对RAW264．7细胞生长的影响

3．1．3 油红O染色分析

3．1．5 海带多糖DS-LJP，SLJP-1，SLJP-2，SLJP-3对oxLDL诱导的RAW264．7细胞TC、FC含量的影响

3．1．5 海带多糖硫酸化衍生物SLJP-1，SLJP-2，SLJP-3对oxLDL诱导的RAW264．7 细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、PPAR-γ mRNA表达的影响

3．1．6 海带多糖硫酸化衍生物SLJP-3对oxLDL诱导的RAW264．7细胞TLR2，TLR4及JNK蛋白表达的影响

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况