阿伐他汀伍用大豆异黄酮对实验性高血脂动物的调血脂作用及相关机制研究

摘要

近年来,HMG-CoA还原酶抑制剂已被广泛应用于各种类型脂代谢异常的调脂治疗。各项大型随机对照临床试验都证明,该类药物可明显降低心血管事件的风险;一些相关指南也把该类药物推荐为多种心血管疾病治疗方案。尽管取得了显著疗效,但应用此类药物的病人中约有2/3的人仍不能避免一些心血管事件的发生。这就促使研究者将研究方向拓宽到一些新的药物潜在靶点。同时,随着代谢综合征和2型糖尿病患者发病率的增加,血脂代谢异常的人群不断扩大,治疗的需求同样推动新型治疗方案的尝试和指南的形成,特别是针对冠心病高危人群和比较复杂的血脂异常患者。
　　在上述背景下,联合用药的出现和推广成为越来越多医生的选择。目前调脂治疗的联合用药主要还是以HMG-CoA还原酶抑制剂(本文按其制剂命名特点,简称他汀类药物)为基础的联合模式。基于上述背景,本课题组进行了阿伐他汀(atorvastatin,AT)伍用大豆异黄酮(soybean isoflavones,SI)对实验性高血脂动物调脂作用的药效学研究,旨在探索两药伍用的增效减毒的可能性,及血脂调节的相关机制。
　　第一部分正交设计筛选阿伐他汀与若干组分的合理配伍及配比本研究探讨了以AT,泛硫乙胺(pantethine,PT)为基础配伍,银杏黄酮(gingkgo flavonoids,GF)和SI为候选组分的针对脂质代谢紊乱调节作用的配伍研究。
　　1.正交设计筛选AT伍用PT及GF的合理配伍(以下简称为AT+GF+PT)
　　以高脂饲料饲喂大鼠为实验模型,正交设计法获得的实验结果表明,AT20mg/kg伍用GF 120mg/kg，伍用比例为1:6时，具良好调脂作用，因素PT各个剂量之间无显著性差异，舍去不用。
　　2.正交设计筛选AT伍用PT及SI的合理配伍(以下简称为AT+SI+PT)
　　以高脂饲料饲喂大鼠为实验模型，正交设计法获得的实验结果表明，AT 20mglkg伍用SI 60mglkg，伍用比例为1:3时，具良好调脂作用，因素PT各个剂量之间无显著性差异，舍去不用。
　　3. AT+GF+PT与AT+SI+PT对高血脂大鼠血脂调节作用的正交实验结果比较
　　3.1药效学指标比较
　　对高脂血症大鼠血清进行检测发现，GF和SI对TC、TG、LDL的降低都有显著影响(P<0.05)，调节作用具有相似性(P>0.05) ；GF对升高HDL没有显著作用(P>0.05 )，SI对升高HDL具显著作用(P<0.05)。
　　3.2毒理学指标比较
　　对高脂血症大鼠血清进行检测发现，GF和SI与AT分别伍用后，二者均没有使血清天冬氨酸氨基转移酶(ALT)、丙氨酸氨基转移酶(AST)及肌酸激酶(CK)显著性增高(P>0.05)；但GF升高CK的作用高出SI约7％。
　　第二部分AT伍用SI调节实验性高血脂动物血脂代谢的药效学研究
　　1．AT伍用SI对高血脂大鼠的血脂调节作用药效学结果
　　AT伍用SI经高血脂大鼠给药12周实验结果表明，与对照组相比，模型组大鼠血清的TC、TG、LDL指标均有显著升高(P<0.05），而血清HDL有显著降低(P<0.05)。与模型组相比，AT可显著降低血清中TC、LDL((P<0.05)，AT伍用SI(40 mg.kg-1+120 mg.kg-1;20 mg.kg-1)能极显著降低血清TC、LDL(P<0.01)，显著降低TG(P<0.05)，还可极显著升高血清HDL(P<0.01)。AT伍用SI(10 mg.kg-1+30 mg.kg-1)能显著降低血清TC、LDL(P<0.05)，还可显著升高HDL (P<0.05)。与AT组相比，AT伍用SI(40 mg.kg-1+120 mg.kg-1)能极显著降低血清TC、TG、LDL(P<0.01)，可极显著升高HDL (P<0.01)，AT伍用SI (20 mg.kg-1+ 60 mg.kg-1)能显著降低血清TC、TG、LDL(P<0.05)，可显著升高HDL(P<0.05)。提示阿伐他汀伍用大豆异黄酮能明显提高高血脂大鼠的血脂调节能力。
　　2．AT伍用SI对高血脂家兔的血脂调节作用药效学结果
　　AT伍用SI经高血脂家兔给药8周实验结果表明，与对照组相比，模型组家兔血清的TC、TG、LDL指标均有显著升高(P<0.05)，而血清HDL有显著降低(P<0.05)。与模型组相比，AT组可显著降低血清TC、LDL (P<0.05)。AT伍用SI (40 mg.kg-1+120mg.kg-1)和AT伍用SI (20 mg.kg-1+60 mg.kg-1)能显著降低血清TC、TG、LDL(P　　第三部分AT伍用SI对实验性高血脂大鼠血脂调节作用的相关机制研究
　　1．高血脂大鼠肝脏病理切片观察
　　肉眼观察供试大鼠对照组肝组织呈红褐色，有光泽；高脂模型组肝组织呈灰黄色，无光泽，触之有油腻感；各实验组肝组织颜色较对照组颜色稍浅，光泽度稍差。肝脏冰冻切片脂质染色结果表明，对照组肝细胞结构完整，细胞内基本未见脂滴；模型组肝细胞内可见大量脂滴，细胞核被推向一侧；单用AT 20 mg.kg-1大鼠的肝细胞内脂滴较高脂组有所减少；AT伍用SI各剂量组虽均有不同程度的脂质斑块形成，其中AT伍用SI(40mg.kg-1+120mg.kg-1;20mg.kg-1+60mg.kg-1)组的脂质沉积明显少于单用AT 20 mg.kg-1组，AT伍用SI(10 mg.kg-1+30 mg.kg-1）组的脂质沉积与单用AT (20 mg.kg-1)组类似。提示阿伐他汀伍用大豆异黄酮能有效减少脂质在大鼠肝脏中的沉积。
　　2．AT伍用SI对高血脂大鼠肝细胞低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein
　　receptor,LDLR)及载脂蛋白A-1（apolipoproteinA-1,apoA-1）mRNA表达的影响
　　半定量RT-PCR法检测大鼠肝细胞低密度脂蛋白受体LDLR和载脂蛋白apoA-lmRNA的表达。结果显示，各给药组大鼠肝细胞LDL-R、apoA-1 mRNA的表达都比模型组有显著升高，AT伍用SI(40 mg.kg-1+120 mg.kg-l;20 mg.kg-1+60 mg.kg-1）组的LDL-R、apoA-1mRNA表达明显高于单用AT20mg.kg-l组(P<0.05)，AT伍用SI(10 mg.kg-l+30 mg.kg-1)与单用AT 20mg.kg-1组相比，有促进LDLR和apoA-1mRNA表达的趋势。
　　3.AT伍用SI对高血脂大鼠肝细胞LDLR蛋白表达的影响
　　Westem Blot实验显示了特异性抗体对大鼠肝细胞LDLR蛋白的作用。正常对照组和各实验组LDLR蛋白表达丰度明显高于高脂饲料组(P<0.05)，AT伍用SI(40mg.kg-l+120mg.kg-l；20mg.kg-1+60mg.kg-1)的蛋白表达明显高于单用AT20mg.kg-1组(P<0.05)，AT伍用SI(10 mg.kg-1+30 mg.kg-1)与单用AT20 mg.kg-1相比，有升高LDLR蛋白表达的趋势。各给药组大鼠肝脏细胞LDLR的mRNA水平与蛋白含量呈平行性变化，提示LDLR蛋白表达可能主要取决于mRNA水平。
　　结论：
　　1.具调节血脂代谢紊乱作用的目标组方的合理配伍为AT伍用SI，合理伍用配比为1:30。
　　2.AT伍用SI能显著降低实验性高血脂动物的TC、TG、LDL，与单用AT 20 mg.kg-1相比，具有显著性差异；与单用AT 20 mg.kg-1相比，能显著升高HDL，提示两药伍用后能提高实验性高血脂动物血脂代谢的能力。
　　3．AT伍用SI后能明显促进高血脂大鼠肝细胞LDLR mRAN和蛋白表达及促进apoA-l mRNA表达，提示两药伍用调节高血脂大鼠血脂代谢的机制可能通过调节LDLR及apoA-l通路发挥作用。

目录

中文摘要

英文摘要

本课题创新点

引言

材料

第一部分 正交设计筛选目标组方及确定最佳配比

实验方法

实验结果

结果分析

讨论

实验结论

第二部分 AT伍用SI对实验性高脂血症动物血脂调节作用的药效学研究

1.实验方法

2.实验结果

3.结果分析

4.实验结论

第三部分 AT伍用SI对实验性高脂血症大鼠的调血脂作用的相关机制研究

实验方法

实验结果

讨论

实验结论

参考文献

综述

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