巨龙竹速生及巨大相关基因克隆

摘要

本论文分三个部分，第一部分为绪论。通过查阅文献讨论当前巨龙竹速生与巨大的可能机制，包括生长素代谢及信号传导对植物生长的影响、蔗糖代谢途径对植物生长的影响以及其他影响生长的基因，并展望了植物速生与巨大机理研究趋势。 第二部分为巨龙竹cDNA文库构建。用巨龙竹当年所发新叶提取总RNA，所用试剂盒为植物叶RNA抽提试剂盒；采用Creator<'TM> SMART<'TM> cDNA Library constructionkit所提供的方法，合成及纯化cDNA，并将cDNA连接到质粒载体上，通过CaCl<,2>法将重组质粒转化到DH5a中，成功构建了巨龙竹cDNA文库。文库容量为1.04*10<'5>efu/ml，PCR检测表明大多数插入片段均大于1000bp，表明构建的巨龙竹eDNA文库质量较高，为进一步进行EST测序和全长基因克隆打下了基础。 第三部分为目的基因克隆与表达。通过对文献分析，确定一系列的目的基因。分别采用了PCR 筛选文库、RACE方法及文库直接测序三种方法克隆目的基因。获得了六条与生长相关表达序列标签(SUS、SPS、UGT、EXP、SPY、SINA)；八条与叶绿素及核糖体相关的表达序列标签；两条全基因序列(UGP，elF5A)．UGP被连接到pBI121表达载体上，得到表达质粒pBI-u14，并将elF5A连接到pBin19表达载体和pET32表达载体，得到表达质粒pBin38和pET38。这些表达载体可能被转入到表达宿主中，如拟南芥。为进一步研究UGP的功能和探讨与巨龙竹速生巨大的关系奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

声明

1前言

1.1生长素代谢途径对速生与器官大小的影响

1.1.1吲哚乙酸合成、应答、传导

1.1.2 iaUGT基因功能

1.1.3 ANT基因功能

1.1.4控制植物器官大小的机理

1.1.5生长素影响生长的途径

1.2蔗糖合成途径对生长速度的影响

1.2.1尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶UGPase基因功能

1.2.2蔗糖合成酶(SuSy)基因功能

1.2.3磷酸蔗糖合成酶(SPS)基因功能

1.3其他与生长速度及器官大小相关的基因

1.3.1 SPINDLY基因功能

1.3.2 Expansin基因功能

1.4植物速生研究现状与展望

2巨龙竹cDNA文库构建

2.1前言

2.2 cDNA文库构建原理

2.3实验材料和仪器

2.4实验方法

2.5实验结果

2.6讨论

3目的基因克隆及表达载体构建

材料与方法

试剂与仪器

材料

实验方法

3.1 UGP基因克隆

3.2构建UGP基因表达载体

3.3 ANT基因片段克隆

3.4 SUT基因片段克隆

3.5SPS基因片段的克隆

3.6SUSy基因片段的克隆

3.7 UGT基因片段的克隆

3.8 EXP基因片段的克隆

3.9 SPY基因片段的克隆

3.10 SINA基因片段的克隆

3.11对文库质粒直接5'测序分析

3.12构建eIF5A真核表达载体

3.13构建eIF5A原核表达载体

4实验结果与讨论

4.1 DSugp基因克隆及表达

4.1.1 DSugp基因片段克隆

4.1.2 PCR筛选文库

4.2 DSugp的表达载体构建

4.3 DSant基因片段克隆

4.4 DSsut基因片段克隆

4.5 DSsps基因片段克隆

4.5.1 DSspscDNA片段克隆

4.5.2 DSsps基因3'端RACE和5'端RACE扩增

4.6 DSsus基因片段克隆

4.7 DSexp基因片段克隆

4.8 DSugt基因片段克隆

4.9 DSspy基因片段克隆

4.10 DSsina基因片段克隆

4.11文库质粒直接测序

4.12蛋白翻译起始因子5A(eIF5A)的真核表达

4.13蛋白翻译起始因子5A(eIF5A)的原核表达

4.14讨论

5结论与展望

参考文献

附录

致谢