ETS-1诱导肺癌细胞获得内皮表型并促进转移的研究

摘要

本文分为以下几个部分进行探讨：
　　第一部分 非小细胞肺癌ETS-1表达与微血管密度、分期和预后的关系
　　目的：研究非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）中ETS-1蛋白的表达水平，及其与微血管密度（Microvascular density，MVD）的相关性，并探讨ETS-1与NSCLC分期及预后特征的关系。
　　方法：收集2009年9月至20011年6月期间90例NSCLC患者的手术的肿瘤组织（包括癌组织及癌旁组织），制成组织芯片，免疫组化法检测该90对NSCLC组织标本中ETS-1蛋白的表达水平，同时CD31染色标记血管，计算MVD。结合患者的随访资料，分析ETS-1蛋白表达与NSCLC的MVD、分期和预后等临床特征的关系。结果：90例NSCLC癌组织中ETS-1高表达率为77.8％（70/90），显著高于癌旁组织的1.1%（1/90），差异具有统计学意义（P<0.001）。ETS-1的表达量与MVD呈正相关(P<0.05)。对临床随访资料的分析显示，ETS-1的表达水平与肿瘤体积（P<0.05）、T分期（P<0.05）及N分期（P<0.05）呈正相关；ETS-1的表达水平与患者总生存期呈负相关（P<0.001）。
　　结论：NSCLC中ETS-1蛋白过表达。ETS-1蛋白与MVD、肿瘤体积、T分期和N分期呈正相关，而与患者总生存期呈负相关。ETS-1可能是NSCLC的不良预后因素。
　　N分期呈正相关，而与患者总生存期呈负相关。ETS-1可能是NSCLC的不良预后因素。
　　第二部分 H2O2促进NSCLC细胞获得内皮表型及转移
　　目的：研究H2O2促进NSCLC细胞A549、H460的内皮表型以及转移能力的作用及机制。
　　方法：采用H2O2处理NSCLC细胞系A549、H460，运用Westen Blot、免疫荧光检测细胞中ETS-1及内皮特异性表面标记vWF的表达变化，小管形成实验比较各组细胞的成管能力，划痕、Transwell实验比较各组细胞迁移、侵袭能力的差异。为了解ETS-1在上述现象中的介导作用，应用shRNA技术沉默ETS-1后，再采用Westen Blot法检测H2O2处理的细胞中vWF的表达情况。
　　结果：H2O2干预后，NSCLC细胞A549、H460中ETS-1蛋白的表达量显著提高，且两种细胞均出现内皮特异性表面标记vWF的表达。H2O2作用后细胞的成管面积增加，划痕愈合率增加，Transwell迁移、侵袭细胞增多。而沉默ETS-1后，H2O2处理的细胞中vWF表达不增加。
　　结论：H2O2可以诱导肺癌细胞获得内皮细胞的表面标记和功能，并提高其转移能力；其作用可能是通过激活ETS-1蛋白表达而实现的。
　　第三部分 ETS-1促进NSCLC细胞系获得内皮表型及增强转移能力
　　目的：研究ETS-1促进NSCLC细胞H460获得内皮表型及转移能力的作用。
　　方法：通过慢病毒稳定转染NSCLC细胞系H460构建ETS-1高表达组，以及shRNA技术沉默ETS-1构建ETS-1下调组，运用Westen Blot、qPCR、免疫荧光检测各组细胞内皮特异性表面标记的表达（VE-Cadherin，vWF）；运用FITC-Lectin及Dil-ac-LDL摄取实验检测各组细胞的内皮特异性摄取能力；小管形成实验比较各组细胞间成管能力的差异；运用Westen Blot检测各组细胞MMP2、MMP9表达能力的差异；划痕、Transwell实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力的差异。结果：稳定上调ETS-1可促进NSCLC细胞系H460出现明显的内皮特异性表面标记，并获得内皮细胞特异性的Lectin和LDL摄取能力。上调ETS-1的细胞，其成管面积增加，划痕愈合率升高，Transwell迁移、侵袭细胞数明显增多，MMP2及MMP9表达升高；而沉默ETS-1后以上作用均减弱。
　　结论：ETS-1可以促进肺癌细胞获得内皮细胞表型和功能，并且增强肺癌细胞的转移能力。

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前言

参考文献

第一部分 非小细胞肺癌ETS-1表达与微血管密度、分期和预后的关系

引言

材料和方法

实验结果

小结

讨论

第二部分 H2O2促进NSCLC细胞获得内皮表型及转移

引言

材料和方法

实验结果

小结

讨论

第三部分 ETS-1促进NSCLC细胞系获得内皮表型及增强转移能力

引言

材料和方法

实验结果

小结

讨论

参考文献

综述: 肿瘤血管内皮细胞的特征及其肿瘤血管生成中的角色

致谢

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