缺血预处理抑制ArgRS基因和蛋白的表达对大鼠局灶性脑缺血的神经保护作用

摘要

目的：研究缺血预处理对精氨酰-tRNA合成酶（Arginyl-tRNA synthetase， ArgRS）基因和蛋白表达的影响，探索缺血预处理对缺血脑损伤的保护作用，研究脑缺血耐受模型的分子机制。
　　方法：120只雄性SD大鼠分成4组，缺血预处理后脑梗塞组（实验组）50只、脑梗塞组（模型组）50只、假手术组10只，正常组10只，前两组又分为五个亚组，分别为2h、6h、12h、24h、48h，每组各10只，应用Longa线栓改良法制作大鼠MCAO模型。利用甲酚紫染色测定脑梗塞灶面积，应用免疫组织化学方法检测缺血半暗带的TNF-α、P53、caspase-3表达，应用荧光TUNEL法测定缺血半暗带凋亡细胞的表达；用RT-PCR检测ArgRS基因表达，用Western-blot检测ArgRS蛋白表达和caspase-3蛋白的表达。
　　结果：①神经功能功能缺损评分：实验组在各对应时间点评分均显著低于模型组（P<0.05）；假手术组及正常组未见神经功能缺损②脑梗塞面积：在对应时间点，实验组较模型组脑梗塞面积显著降低（P<0.05），假手术组及正常组均未见梗塞灶；③TUNEL法检测凋亡细胞：在对应时间点，实验组的凋亡细胞较模型组显著（P<0.05），假手术组及正常组之间未见明显差异；④TNF-α、P53、caspase-3表达：在对应时间点，实验组相应指标表达较模型组均显著降低（P<0.05），假手术及正常组之间未见明显差异；⑤ArgRs基因和蛋白表达，caspase-3蛋白表达：在相应各时间点，实验组ArgRS基因和蛋白表达均显著低于模型组（P<0.05）；实验组caspase-3蛋白表达较模型组显著减低（P<0.05）；假手术组及正常组之间caspase-3蛋白表达无统计学意义。
　　结论：脑缺血预处理可以起到脑组织神经保护作用而达到脑缺血耐受目的，这种神经保护机制可能是缺血预处理抑制了ArgRS基因及蛋白的表达。

目录

声明

英文缩略词表

前言

1. 材料与方法

1.1 实验动物及分组

1.2 实验主要试剂及实验仪器

1.3 动物模型的制备及取材

1.4 实验方法

1.5统计分析

2.1 神经功能缺损评分

2.2 甲酚紫染色测定脑梗塞面积

2.3 苏木素-伊红染色观察脑组织形态

2.4 TUNEL法检测细胞凋亡水平

2.5 免疫组织化学染色

2.6 Western-blot测定caspase-3蛋白表达

2.7 RT-PCR测定ArgRS基因在转录水平的表达变化

2.8 缺血预处理对脑梗塞后不同时间点ArgRS蛋白表达影响（Western-blot）

3.讨论

3.1 脑缺血后神经损伤的分子机制

3.2 缺血预处理抑制TNF-α、P53、caspase-3表达，减轻脑缺血神经细胞凋亡

3.3 缺血预处理发挥神经保护作用可能的分子生物学机制——ArgRS基因抑制

3.4 存在的问题和下一步研究方向

4. 结论与展望

参考文献

附图

综述：缺血预处理的神经保护作用研究

致谢