滇南边境地区虫媒病毒调查研究

摘要

研究目的:云南省地处中国西南边陲，位于北纬21°8'32''—29°15'8''，东经97°31'39''—106°11'47''之间，北回归线横贯本省南部。云南省西部和西南部与缅甸接壤，南部与越南、老挝毗邻，是我国毗邻周边国家最多、边境线最长的省区之一。云南地势西北高东南低，海拔高差异常悬殊，最高为6740米，最低仅76．4米。地域辽阔、自然条件复杂、垂直气候明显。夏季，阴雨天气多，适于各类宿主动物、吸血节肢动物的生存繁殖和某些虫媒病毒的存在及传播，而且梁国栋、张海林等已经在云南省分离到乙型脑炎病毒、登革热病毒、基孔肯雅（CHIK）病毒、辛德毕斯病毒、巴泰病毒、版纳病毒（banna virus），并且在蚊虫活动高峰的时候，当地同时存在病因不明的发热和病毒性脑炎患者，提示当地存在其它虫媒病毒性疾病的可能性。加之旅游和边境贸易的往来频繁。因此，对滇南边境地区进行虫媒病毒病原学的调查，全面了解当地存在和循环的虫媒病毒种类与分布情况，对于研究我国云南的虫媒病毒生物学及分子生物学特征、预防和控制当地虫媒病毒病等均具有重要意义。 本课题对滇南部分边境地区进行虫媒病毒调查，于2006年8月在禄丰县、勐海县、景洪市；2007年9月份在文山、河口和麻栗坡县共6个地区采集蚊虫标本并进行虫媒病毒的分离鉴定。勐海县、景洪市；2007年9月份在文山、河口和麻栗坡县共6个地区采集蚊虫标本并进行虫媒病毒的分离鉴定。 研究内容:标本采集于2006、2007年8～9月在云南省的勐海县、禄丰县、景洪市、麻栗坡县、河口县、文山县6市县共10个采集点，夜间在人房和畜圈（舍）采集蚊虫标本，分类后按蚊种进行分装，立即冻存于液氮中直至用于病毒分离。两年共采集15801只，其中库蚊11970只，按蚊为2712只，伊蚊1066只，阿蚊53只。本次采集蚊虫标本分类可见，云南省蚊虫仍然以三带喙库蚊为当地优势蚊种。 研究方法:首先把采集到的蚊虫标本（191批）全部研磨，采用组织细胞培养的方法分离病毒，将蚊虫研磨处理后的离心上清接种C6/36细胞，再用病变C6/36细胞上清接种BHK—21细胞，最后通过形态学、血清学、分子生物学方法鉴定。 结果:共获得15株可引起细胞规律病变的分离物，有10株分离自三带喙库蚊，3株分离自伊蚊，其他2株分离自按蚊。最后鉴定结果为版纳病毒（BAV）1株，淡色库蚊浓核病毒（CppDNV）5株、还有9株分离物需要进一步鉴定。 版纳病毒（BAV）：从三带喙库蚊中分离到1株BAV，通过测定这个分离株第12片段编码区序列，结果显示BAV可分为两个进化群，即印度尼西亚和中国，显示了病毒在地域分布上的差异。但是，新分离WS0704—2与来自辽宁（LN0684、LN0688、LN0689）和北京（BJ95—75）的中国分离株具有明显的不同，位于一条独立的进化枝中，说明该地区分布的BAV在进化上相对独立。 浓核病毒（DNV）：从三带喙库蚊、按蚊两种蚊种中分离到5株DNV。DNV是一种昆虫病毒，该病毒通常对节肢动物宿主有一定致病性。在我国辽宁、云南、新疆和贵州省的淡色库蚊、三带喙库蚊、致倦库蚊、中华按蚊等蚊虫中均分离到该病毒，提示CppDNV广泛分布于我国境内。CppDNV对C6/36细胞具有典型的CPE效应，而并不在哺乳动物细胞中增殖和产生病变（尽管在自然界中CppDNV很好的适应了其蚊虫宿主）。 研究意义及创新性:首次在我国滇南边境地区蚊虫种类及虫媒病毒调查，了解了滇南边境地区蚊虫种类和分布特征；从蚊虫标本中分离到了BAV、DNV共2种虫媒病毒，不但丰富了我国云南省滇南边境虫媒病毒的种类，而且为了解当地传染病病因及病毒性传染病的预防控制提供了极为重要的基础数据，将产生极大的社会效益。 本研究中分离的BAV是首次在文山分离到，该病毒属于Seadorna病毒属3个成员中的一种病毒（BAV），说明该区域是双链RNA病毒活跃的地区。BAV的存在与当地人畜疾病的关系尚待考证。首次在滇中和滇南边境地区分离到5株DNV病毒，对了解，此类病毒的分布和分子遗传特征有重要意义。此次调查丰富了我国虫媒病毒分子生物学研究内容，为深入研究我国存在和流行的虫媒病毒积累了资料。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略语

声明

前言

第一部分2006年云南省滇南部分地区虫媒病毒调查

前言

第一章标本采集

1材料和方法

2结果

3讨论

4结论

第二章病毒分离

1材料与方法

2结果

3讨论

4结论

第三章病毒鉴定

1材料方法

2结果

3讨论

4结论

第二部分 云南省文山等中越边境地区虫媒病毒调查

前言

第一章标本采集

1材料和方法

2结果

3讨论

4结论

第二章病毒分离

1材料与方法

2结果

3讨论

4结论

第三章病毒鉴定

1材料方法

2结果

3讨论

4结论

总 结

展望

参考文献

附录1本研究中采集的全部蚊虫标本的背景资料

综述1 蝙蝠作为虫媒病毒宿主的研究进展

综述2 蝙蝠作为新发现病毒储存宿主的研究进展

发表论文及待发表论文

致谢