IL-6过表达慢病毒稳转细胞系构建及其对HBsAg、HBeAg和HBV-DNA的影响

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中英文缩略词表

1.前言

2.材料与方法

2.1实验材料

2.1.1实验设备

2.1.2实验试剂

2.1.3 细胞来源

2.2.1 细胞复苏

2.2.2 细胞培养及传代

2.2.3 细胞冻存

2.2.4 细胞转染

2.2.5 总RNA的抽提

2.2.6 RNA反转录

2.2.7 qRT-PCR实验方法

2.2.8 pMIGR1-IL6质粒获得及鉴定

2.2.9 稳定过表达pMIGR1-IL-6质粒的鉴定

2.2.10 感受态制备及扩增

2.2.11 质粒提取

2.2.12 IL-6质粒的病毒上清的制备

2.2.13 嘌呤霉素筛选浓度的确定

2.2.14 稳定过表达IL-6细胞系的筛选

2.2.15 pcDNA1.3质粒转染Huh7、HepG2、Huh7/IL-6细胞

2.2.16 化学发光微粒子免疫检测技术分析细胞培养上清HBsAg表达水平

2.2.17 化学发光微粒子免疫检测法分析细胞培养上清HBeAg表达水平

2.2.18 PCR-荧光探针法分析细胞培养上清HBV-DNA表达水平

2.2.19 数据分析

3.实验结果

3.1 IL-6目的基因扩增鉴定

3.2 MIGR1-IL-6慢病毒载体质粒酶切及测序鉴定

3.3 电化学发光法检测Huh7/con和Huh7/IL-6稳转细胞系上清中IL-6表达水平

3.4 qRT-PCR检测Huh7/con和Huh7/IL-6稳转细胞系中IL-6的mRNA水平

3.5 pcDNA1.3质粒转染不同细胞48h后不同时间段细胞上清中IL-6表达水平

3.6 IL-6处理pcDNA1.3质粒转染的Huh7细胞不同时间段细胞上清中HBsAg、HBeAg、HBV-DNA表达水平

3.7 IL-6处理pcDNA1.3质粒转染的HepG2细胞不同时间段细胞上清中HBsAg、HBeAg、HBV-DNA表达水平

3.8 pcDNA1.3质粒转染后Huh7/IL-6细胞不同时间段细胞上清中HBsAg、HBeAg、HBV-DNA表达水平

4.讨论

5.结论

参考文献

附录

致谢

综述:IL-6在HBV感染中作用的研究进展