声明
1 前言
2 实验材料
2.1 实验动物
2.2 细胞株
2.3 试剂
2.4 仪器与设备
3 实验方法
3.1β-arrestin2基因敲除对CCl4诱导的小鼠氧化应激和肝纤维化的影响及CP-25的作用
3.1.1 CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型的建立与分组
3.1.2肝脏组织病理学检查
3.1.3 DHE 荧光探针检测小鼠肝组织冰冻切片ROS表达
3.1.4 免疫荧光双染法检测小鼠肝脏中β-arrestin2、NOX4的表达情况
3.1.5Western blot法检测NOX4、胶原、MMP-13、TIMP-1表达的变化
3.1.6 免疫组化法检测NOX4、胶原在肝纤维化小鼠肝脏中的表达
3.2.1 LX-2细胞的培养
3.2.3Western blot法检测不同浓度AngⅡ刺激对NOX4、α-SMA蛋白表达的影响
3.2.4NOX4 siRNA的筛选和转染效率验证
3.2.5NOX4 siRNA对LX-2中氧化应激及纤维化指标表达的影响
3.3.1 实验分组
3.5 统计学处理
4 结果
4.1β-arrestin2基因敲除对CCl4诱导的小鼠肝纤维化和氧化应激的影响
4.1.2 β-arrestin2基因敲除对CC14诱导的肝纤维化小鼠肝脏ROS产生的影响
4.1.3 肝纤维化小鼠肝组织β-arrestin2、NOX4的表达情况
4.1.5 β-arrestin2基因敲除对CC14诱导的肝纤维化小鼠肝脏中MMP-13、TIMP-1表达的影响
4.2 CP-25对CCl4诱导的小鼠肝纤维化的影响
4.2.2 CP-25对CC14诱导的肝纤维化小鼠肝脏NOX4、III型胶原和β-arrestin2表达的影响
4.2.3 CP-25对CC14诱导的肝纤维化小鼠肝脏中MMP-13和TIMP-1表达的影响
4.3 NOX4 siRNA对LX-2细胞中氧化应激及纤维化指标的影响
4.3.1不同浓度AngⅡ刺激对LX-2细胞中NOX4、α-SMA表达的影响
4.3.2 NOX4 siRNA筛选与转染效率验证
4.3.4 NOX4 siRNA对AngⅡ刺激的LX-2细胞Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
4.4 β-arrestin2 siRNA对AngⅡ刺激的LX-2细胞中纤维化指标及下游信号通路相关蛋白表达的影响
4.4.1 β-arrestin2 siRNA转染效率验证
4.4.2 β-arrestin2 siRNA对AngⅡ刺激的LX-2细胞ROS产生的影响
4.4.4β-arrestin2 siRNA对AngⅡ刺激的LX-2细胞中ERK和JNK激活的影响
4.5 CP-25对LX-2细胞中氧化应激及纤维化指标表达的影响
4.5.1 CP-25对LX-2细胞ROS表达的影响
4.5.2 CP-25对AngⅡ刺激的LX-2细胞中β-arrestin2、NOX4和I型胶原蛋白表达的影响
5 讨论
5.1氧化应激在肝纤维化发展过程中发挥重要作用
5.2β-arrestin2可能通过上调NOX4介导氧化应激
5.3 CP-25可能通过下调β-arrestin2降低NOX4和ROS的生成发挥抗肝纤维化作用
6 结论
参考文献
附录
致谢
综述:G蛋白偶联受体与肝损伤的研究进展
