一、半胱氨酰白三烯受体1对血管内皮细胞的增殖和迁移的调节 二、5-脂氧酶/绿荧光蛋白转染评价PC12细胞损伤后5-脂氧酶核膜移位

摘要

目的:半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes,包括LTC4、LTD4和LTE4)是花生四烯酸5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)途径代谢产物,半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1)是已克隆和鉴定的受体之一。已有实验表明CysLT1受体与血管再生相关,但尚不清楚其对血管再生中内皮细胞的功能调节,而内皮细胞的增殖和迁移是血管再生的重要步骤。本试验目的是观察CysLT1受体对血管内皮细胞的增殖、迁移的影响,并探讨其作用机制。方法:以光学显微镜下形态及台盼蓝拒染计数,观察LTD4作用24、48、72 h后细胞的形态和数量变化,Brd U掺入法检测细胞增殖;采用伤口愈合方法,观察LTD4作用12、24、36 h后细胞迁移;采用Western blotting方法,观察LTD4作用5 min、30 min、1 h、4 h和12 h后ERK1/2的磷酸化。在LTD4作用前30min加入CysLT1受体选择性拮抗剂montelukast和非选择性拮抗剂Bay u9773,观察对上述指标的影响;在LTD4作用前30 min加入ERK1/2抑制剂U0126,观察细胞迁移的变化。结果:台盼蓝拒染计数及Brd u阳性细胞计数显示,LTD4对EA.hy926细胞增殖无显著性影响。但0.1～100 nmol/L LTD4作用12 h后即能促进EA.hy926细胞迁移;10 nmol/L LTD4作用30 min和1 h增加ERK1/2的磷酸化。25 nmol/LCysLT1受体选择性拮抗剂montelukast和非选择性拮抗剂Bay u9773均能抑制LTD4诱导的迁移及ERK1/2磷酸化的作用,1μmol/L ERK1/2抑制剂U0126也能显著性抑制LTD4诱导的EA.hy926细胞的迁移。结论:1.LTD4对EA.hy926细胞增殖无影响作用。2.CysLT1受体介导EA.hy926细胞的迁移,ERK1/2的磷酸化参与调节这一过程。目的:通过绿荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)/5-脂氧酶(5-lipoxygenase,5-LOX)稳定转染PC12细胞,以可视化方法观察5-LOX在不同损伤后的变化。方法:将带有5-LOX基因的pEGFP-C2质粒及pEGFP-C2质粒(对照),稳定转染至PC12细胞;在缺糖缺氧(oxygen-glucose deprivation,OGD)、H2O2和NMDA处理后,荧光显微镜下观察GFP/5-LOX在细胞内的定位;同时,以免疫细胞化学方法观察野生型5-LOX分布及其变化。结果:转染GFP/5-LOX的细胞内,GFP/5-LOX主要均匀表达于细胞核内;仅转染GFP的细胞GFP表达于胞核和胞浆。OGD和H2O2处理后,分别有50.6％和57.7%细胞的GFP/5-LOX移位到核膜;NMDA处理或仅转染GFP的细胞,未见核膜移位现象。野生型5-LOX分布在细胞核和细胞浆内,3种损伤处理均诱导核膜移位。结论:1.稳定转染GFP/5-LOX的PC12细胞,GFP/5-LOX主要分布在细胞核。2.不同损伤处理诱导的5-LOX核膜移位,有不同的特点。

目录

缩略词表

第一部分 半胱氨酰白三烯受体1对血管内皮细胞的增殖和迁移的调节

中文摘要

英文摘要

正文

引言

材料

实验方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 5-脂氧酶/绿荧光蛋白转染评价PC12细胞损伤后5-脂氧酶核膜移位

中文摘要

英文摘要

正文

引言

材料

实验方法

结果

讨论

参考文献

综述 血管生成与慢性炎症以及半胱氨酰白三烯及其受体的调节

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