甘草提取物中芳香化酶小分子配体的发现及其芳香化酶抑制活性研究

摘要

本文对甘草(Glycyrrhiza uralensis)乙醇提取物的二氯甲烷部分化学成分进行了研究,从中分离得到30个化合物,其中26个黄酮类化合物,并通过波谱手段对化合物结构进行了鉴定。芳香化酶是雄激素转化为雌激素的限速酶,与女性乳腺癌的发生和发展密切相关。芳香化酶抑制剂作用机制之一是与酶的天然底物具有相似的结构,可以竞争芳香化酶的结合位点。目前常用的芳香化酶抑制剂筛选方法是TLC薄层层析法和3H20法,这些方法花费高,操作繁琐。本文致力于寻找一种简单,快速有效的方法来发现具有芳香化酶抑制活性的化合物。文献报道黄酮类化合物对芳香化酶有抑制作用,选择富含黄酮类化合物的甘草作为研究对象。HPLC-MS/MS结合超滤离心的方法检测到甘草二氯甲烷提取物中21个(4、7、8、10、11、13、15、18、19、20、23、A~J)与芳香化酶结合能力较强的化合物。他们分别为异黄酮、二氢异黄酮、异戊烯基取代的异黄烷类化合物,异黄酮类化合物具有较强的结合能力,且异戊烯基取代能够增强化合物与芳香化酶的结合能力。由于所用芳香化酶为重组蛋白,其中含非芳香化酶肽段,会造成假阳性的结果,为消除非芳香化酶肽段的影响,建立了免疫沉淀联合LC-MS的方法来进一步检测甘草中进入MCF-7细胞并且与芳香化酶结合发挥抑制作用的化合物,检测到7个(7、15、18、19、23、D、E)化合物能够进入MCF-7细胞并且与芳香化酶结合。并通过活性筛选模型验证了免疫沉淀联合LC-MS方法发现芳香化酶抑制剂的可行性。

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摘要

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插图和附表清单

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第1章 绪论

第一节 甘草中化学成分及药理研究进展

1.1 甘草中化学成分研究进展

1.2 甘草药理活性的研究进展

第二节 芳香化酶抑制剂的研究进展

第三节 本文研究内容

第2章 甘草中化学成分的研究

2.1 甘草的化学成分

2.2 甘草化学成分的结构解析

第3章 甘草中芳香化酶小分子配体的研究

3.1 HPLC-MS研究甘草提取物中芳香化酶小分子配体的实验原理

3.2 HPLC-MS研究甘草提取物中芳香化酶小分子配体的实验方法

3.2.1 实验材料及仪器

3.2.2 色谱及质谱条件

3.2.3 实验步骤

3.3 HPLC研究甘草提取物中芳香化酶小分子配体的实验结果

3.3.1 HPLC分析甘草中化合物与芳香化酶的结合能力

3.3.2 LC-MS/MS鉴定甘草二氯甲烷提取物化合物结构

第4章 基于LC-MS和免疫沉淀技术的甘草中芳香化酶配体研究

4.1 实验原理

4.2 实验方法

4.2.1 实验材料及仪器

4.2.2 分析色谱条件

4.2.3 实验步骤

4.3 实验结果

4.3.1 LC-MS联合免疫沉淀技术检测甘草中与芳香化酶结合的化合物

4.3.2 生物模型检测甘草中黄酮类化合物对芳香化酶的抑制作用

第5章 化学成分的提取与分离

第一节 实验仪器与试剂

5.1 仪器

5.2 材料与试剂

第二节 甘草中化学成分的提取与分离

5.3 植物来源与鉴定

5.4 药材的提取

5.5 化学成分的分离

第6章 结论与讨论

参考文献

作者简历

附图