重症肌无力的多基因多位点单核苷酸多态性分析

摘要

背景：重症肌无力（myasthenia gravis，MG）是T细胞依赖的慢性自身免疫性疾病，由神经肌肉接头处乙酰胆碱受体抗体介导，以骨骼肌、延髓肌和眼外肌波动性的疲乏无力为特点，其病因尚未完全明确。国内外关于重症肌无力的遗传流行病学研究表明，其发病与遗传、内分泌、环境和免疫等因素有关，但是任何一种因素都不能完全解释MG的发病机理。有学者认为多因素、多基因积累共同导致了MG的发生，不同的个体可能存在不同的病因组合，其中遗传基因的易感性占了重要地位。大量研究表明，不同的自身免疫性疾病可能有共同的易感因素，一种自身免疫性疾病的易感基因可能会与其它自身免疫性疾病相关。单核苷酸多态性（SNP）是人类基因组中最常见的遗传多态性，常用来研究与复杂性疾病的关联性。而且，在不同的人种SNP与疾病易感性的相关性可有不同结果。本研究筛选了与日本其它自身免疫性疾病如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等易感性紧密相关的9个异常SNP作为研究重点，试图研究这些基因多态性与MG的相关性。
　　 目的：分析分化群244（CD244）rs6682654、Fc受体样因子3（FCRL3）rs7528684、可溶性载体家族22A4（SLC22A4）rs2073838、Runt相关转移因子（RUNX1）rs2268277、信号传导及转录激活因子4（STAT4）rs7574865、肿瘤坏死因子受体相关因子1（TRAF1）rs3761847、补体成分5（C5）rs10818488、B淋巴细胞激酶（BLK）rs13277113、干扰素调节因子5（IRF5）rs2004640的单核苷酸多态性，研究日本重症肌无力与这些异常基因和位点的相关性，探讨MG的遗传背景及发病机制，以便早期基因诊断和早期筛选MG高危人群，为MG的治疗提供依据。
　　 方法：采用病例-对照研究的方法，病例组纳入日本东京女子医科大学门诊和病房的52例重症肌无力患者，抽取外周血抗凝，提取白细胞DNA，利用ABI stepone实时定量PCR仪和taqman SNP genotyping试剂盒荧光探针技术，检测这些单核苷酸多态性位点，以既往对日本人进行研究的文献中以上位点的正常对照为对照，进行Hardy-Weinberg平衡分析，计算OR和95％可信区间（CI），行卡方检验统计分析这些SNP与MG的相关性。
　　 结果：
　　 1.IRF5 rs2004640的T等位基因和TT基因型与日本重症肌无力易感性相关（T vsG：x2=12.552，P<0.001，OR=2.071，95％CI[1.375-3.118]；TT vs TG+GG：x2=15.641，P<0.001，OR=3.719，95％CI[1.868-7.400]），提示该SNP是MG的风险因素。
　　 2.FCRL3 rs7528684的C等位基因和CC基因型与MG易感性无相关（C vs T：x2=0.508，P=0.476，OR=0.861，95％CI[0.570-1.300]；CC VS CT+TT：x2=0.506，P=0.479，OR=1.306，95％CI[0.622-2.743]），提示该SNP不是MG的风险因素。
　　 3.CD244 rs6682654的T等位基因和TT基因型与MG易感性无相关（T vs C：x2=0.225，P=0.635，OR=0.908，95％CI[0.608-1.356]；TT vs CT+CC：x2=0.402，P=0.526，OR=0.771，95％CI[0.344-1.728]），提示该SNP不是MG的风险因素。
　　 4.SLC22A4 rs2073838的A等位基因和AA基因型与MG易感性无相关（A vs G：x2=0.177，P=0.674，OR=1.093，95％CI[0.723-1.652]；AA vs AG+GG：x2=2.027，P=0.155，OR=1.740，95％CI[0.804-3.7641），提示该SNP不是MG的风险因素。
　　 5.RUNX1 rs2268277的C等位基因和CC基因型与MG易感性无相关（C vs G：x2=0.088，P=0.767，OR=1.064，95％CI[0.706-1.605]；CC vs CG+GG：x2=1.769，P=0.183，OR=0.499，95％CI[0.176-1.417]），提示该SNP不是MG的风险因素。
　　 6.STAT4 rs7574865的T等位基因和TT基因型与MG易感性无相关（T vs G：x2=0.048，P=0.826，OR=1.048，95％CI[0.692-1.586]；TT vs TG+GG：x2=0.366，P=0.545，OR=0.729，95％CI[0.260-2.040]），提示该SNP不是MG的风险因素。
　　 7.TRAF1 rs3761847的A等位基因和AA基因型与MG易感性无相关（Avs G：x2=0.158，P=0.691，OR=1.082，95％CI[0.734-1.595]；AA vs AG+GG：x2=0.054，P=0.816，OR=0.921，95％CI[0.459-1.846]），提示该SNP不是MG的风险因素。
　　 8.C5 rs10818488的G等位基因和GG基因型与MG易感性无明显相关（G vs A：x2=0.592，P=0.442，OR=1.164，95％CI[0.790-1.716]；GG vs AG+AA：x2=0.071，P=0.790，OR=1.095，95％CI[0.560-2.145]），提示该SNP不是MG的风险因素。
　　 9.BLK rs13277113的G等位基因和GG基因型与MG易感性无相关（G vs A：x2=0.649，P=0.421，OR=1.182，95％CI[0.786-1.777]；GG vs AG+AA：x2=0.345，P=0.557，OR=1.276，95％CI[0.564-2.886]），提示该SNP不是MG的风险因素。
　　 结论：ABI stepone实时定量PCR仪和stepone software2.1具有自动单核苷酸多态性基因分型识别功能，具有直观的图表输出和量值分配特性，可准确快捷获得基因分型结果。本文首次分析了FCRL3 rs7528684、CD244 rs6682654、SLC22A4 rs2073838、RUNX1 rs2268277、STAT4 rs7574865、TRAF1 rs3761847、C5 rs10818488、BLK rs13277113和IRF5 rs2004640的单核苷酸多态性与日本重症肌无力的相关性，发现IRF5 rs2004640与MG易感性相关，显示了该SNP在自身免疫性疾病中的作用。但是其余8个SNP均未发现与日本重症肌无力易感性相关。此外由于种族差异，仍需进行大样本量、不同种族的重复性研究。