补阳还五汤对博来霉素致大鼠肺纤维化模型中HMGB1mRNA和TLR4mRNA的表达变化

摘要

目的：观察补阳还五汤对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠模型中HMGB1mRNA和TLR4mRNA的表达变化，探讨补阳还五汤对肺纤维化的干预作用，为中医药治疗肺纤维化提供依据。
　　方法：选取144只SD雄性大鼠，体重200±10g，适应性饲养1周后，随机分为6组，即正常对照组、模型组、强的松组、补阳还五汤低剂量组、补阳还五汤中剂量组、补阳还五汤高剂量组。除正常对照组外其余5组均采用肺纤维化的经典造模方法，向气管内一次性注入0.2~0.3ml博来霉素生理盐水溶液（5mg/kg），注射后迅速将大鼠直立并旋转；正常对照组在相同条件下，一次性向气管内注入等量的生理盐水。造模后24小时，正常对照组及模型组均按10ml/kg·d的标准灌服双蒸馏水；强的松组按4.2mg/kg·d的标准灌服强的松混悬液；补阳还五汤低、中、高剂量组分别按6.83g/kg·d、13.66g/kg·d、27.32g/kg·d灌服补阳还五汤水溶液。灌胃28d期间观察大鼠的一般情况。造模后于第7d、14d、28d各组分批采用剪断右侧股动脉放血法处死8只大鼠，处死后开胸暴露双肺，观察肺组织大体情况，摘取右肺组织；HE染色和Masson染色评估肺组织的肺泡炎症、纤维化程度，按照Szapiel法分为4级；RT-PCR法检测肺组织中HMGB1mRNA和TLR4mRNA的表达变化。
　　结果：1.一般情况：正常对照组大鼠毛发光滑，摄食正常，身体壮硕，好打斗，体重增加。模型组大鼠精神不振，毛发晦暗枯槁，呼吸困难，活动及摄食减少，口唇及四肢爪甲紫绀。各治疗组大鼠精神较好，呼吸较为平稳，活动减少、食欲减退、唇甲紫绀等症状随时间推进均有不同程度的改善。
　　2.病理形态学：正常对照组未见明显病理学改变。与正常对照组相比，模型组和各治疗组大鼠肺组织均可见肺泡腔内炎性细胞浸润，肺间隔增宽，纤维母细胞及纤维细胞增生，胶原纤维形成（P<0.05）。与模型组比较，各治疗组的肺泡炎和纤维化病变均有不同程度的减轻（P<0.05）。与强的松对照组相比，同期补阳还五汤各剂量组均无明显差异（P>0.05）。补阳还五汤各剂量组之间比较无明显差异（P>0.05）。
　　3.肺组织中HMGB1mRNA的表达：正常对照组大鼠肺组织中HMGB1mRNA在7d、14d、28d均有一定量的基础表达。与正常对照组相比，其余各组大鼠肺组织中HMGB1mRNA的表达均有不同程度的增高（P<0.05）；与模型组相比，各治疗组的HMGB1mRNA表达均有不同程度的降低（P<0.05）；与强的松组相比，补阳还五汤各剂量组在第7d时与同期强的松组比较差异不大，但在第14d、28d时明显降低（P<0.05）。
　　4.肺组织中TLR4mRNA的表达：与正常对照组相比，其余各组大鼠肺组织中TLR4mRNA的表达均有不同程度的增高（P<0.05）；与模型组相比，各治疗组的TLR4mRNA表达均有不同程度的降低（P<0.05）；与强的松组相比，第7d时补阳还五汤各剂量组TLR4mRNA的表达高于同期强的松组（P<0.05），但在第14d、28d时与同期强的松组比较差异不大。
　　结论：1.模型组与各治疗组出现的肺泡炎和纤维化病理学改变高于同期正常对照组，生物学特征也有明显变化，与参考文献报道一致，说明我们成功的制备了大鼠肺纤维化模型。
　　2.各治疗组均能下调HMGB1mRNA，其中补阳还五汤各剂量组在第14d、28d时下降最为明显，提示补阳还五汤主要作用于纤维化阶段，抑制晚期纤维化的形成。
　　3.各治疗组均能下调TLR4mRNA，其中强的松组在第7d时下调效果明显优于补阳还五汤各剂量组，但在第14d、28d时无明显差异，进一步说明补阳还五汤主要作用于纤维化阶段，也可能是TLR4作为HMGB1的下游信号，补阳还五汤通过下调HMGB1阻断TLR4的表达，从而抑制晚期纤维化进展。