肾脏干细胞(祖细胞)与组织工程肾样组织构建

摘要

肾功能衰竭是临床难治性疾病之一,目前的治疗方法如透析和肾移植均存在诸多不足,寻找新的治疗途径是目前研究的重要方向。随着组织工程技术的发展,肾脏组织构建逐渐成为近年研究的热点,但由于种子细胞来源及组织构建技术等诸多瓶颈问题的存在,目前的发展受到了很大制约。
　　 目的：
　　 系统分析肾脏组织内干细胞(祖细胞)相关表面抗原的表达,富集肾脏干细胞(祖细胞)并证实其多向分化潜能,探讨其用于肾损伤修复及组织工程肾样组织构建的可行性。
　　 方法：
　　 (1)E16大鼠胚胎后肾组织块或细胞与生物可降解材料复合植入裸鼠皮下,探讨构建组织工程肾样组织的可行性,并筛选适宜的支架材料。
　　 (2)通过免疫组化及流式细胞技术分析小鼠肾脏组织中干细胞(祖细胞)相关表面抗原的表达,确定富集肾脏祖细胞的表面抗原。
　　 (3)通过流式细胞分选技术富集小鼠肾脏CD133+细胞,鉴定其多向分化潜能。
　　 (4)建立SCID鼠急性肾损伤模型,将CD133+细胞注入肾血管中,观察细胞参与肾脏损伤的修复与再生;将CD133+细胞与ECMgel混合注射到SCID小鼠皮下,探讨CD133+细胞构建肾样结构的可行性。
　　 结果
　　 (1)胚胎后肾组织块在皮下可以形成肾样组织,但后肾细胞未能形成肾样结构,两种材料相比,ECMgel较PGA更适于肾组织构建。
　　 (2)新生和成年小鼠肾脏组织中均可见CD24、CD133、SSEA1、Strol和Flk1等干细胞(祖细胞)相关表面抗原表达,且新生鼠上述抗原的表达率均高于成年鼠；综合分析CD133较为适合作为富集肾脏干细胞(祖细胞)的表面抗原。
　　 (3)肾脏CD133+细胞具有良好的体外增殖能力,且能被定向诱导为上皮、脂肪、骨和神经表型的细胞。
　　 (4)GFP示踪显示,CD133+细胞参与了肾损伤的修复与再生；CD133+细胞与ECMgel混合在皮下组织中可以自发形成肾小管样结构。
　　 结论
　　 小鼠肾脏组织表达多种干细胞(祖细胞)相关表面抗原,经CD133富集后的细胞具有良好的体外增殖能力及多向分化潜能,提示肾脏干细胞(祖细胞)的存在；小鼠肾脏CD133+细胞可参与肾损伤的修复与再生,而且这些细胞可能可以作为组织工程肾样组织构建的种子细胞。

目录

文摘

英文文摘

英文缩略词表

引言

第一章 胚胎后肾组织块或细胞构建组织工程肾样组织

第二章 干细胞相关表面抗原在小鼠肾脏组织中的表达

第三章 小鼠肾脏CD133阳性细胞的分离、培养及体外多分化研究

第四章 小鼠肾脏CD133阳性细胞参与肾脏损伤修复及肾小管样结构初步构建

全文结论

参考文献

附录 抗体一栏表

综述

参考文献

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