沙培林抑制胃癌SGC7901细胞增殖并诱导凋亡机制的研究

摘要

目的：观察沙培林作用于胃癌细胞后，细胞增殖状况、细胞周期及p53、p27kip1、PCNA蛋白表达的变化以及对胃癌细胞凋亡的影响，初步探讨沙培林诱导胃癌细胞凋亡的分子生物学机制。 方法: （1）选取人胃癌细胞株SGC7901，常规体外培养。 （2)以不同浓度梯度的沙培林（0、0.001、0.01、0.1和0.5 KE/ml）处理6h、12h、24h和48h 后，噻唑蓝（MTT）比色法观察SGC7901 细胞的生长情况。 （3)0.5 KE/ml 沙培林作用于胃癌SGC7901 细胞48h 后，流式细胞仪检测细胞周期的变化情况。 （4)免疫细胞化学染色观察药物处理前后的p53、p27kip1、PCNA蛋白的表达变化。 （5)沙培林0.5KE/ml处理48h 后，荧光染色观察细胞凋亡情况；膜连蛋白V-硫氰酸荧光素/碘化丙啶（AnnexinV-FITC/ PI）凋亡试剂盒观察沙培林作用后SGC7901细胞的凋亡情况。 （6)半定量逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）检测沙培林处理后细胞凋亡相关基因survivin、caspase-3 mRNA的表达变化情况。 结果: （1)沙培林对于SGC7901 胃癌细胞具有抑制增殖效应，并在一定范围呈现时间和浓度相关性。 （2)沙培林（0.5 KE/ml）作用48h后，细胞周期检测发现：与空白对照组相比，SGC7901细胞G0/G1期细胞下降，S期细胞增多（P<0.05）。 （3)免疫细胞化学结果显示：沙培林处理可使SGC7901细胞p53 蛋白阳性表达率下调，p27kip1蛋白阳性表达率上调，与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）；PCNA蛋白表达组间无统计学差异（P>0.05）。 （4)沙培林可以诱导胃癌SGC7901细胞发生凋亡。Annexin V-FITC/PI凋亡检测结果显示：沙培林实验组细胞凋亡率显著高于空白对照组（P<0.05）。 （5)半定量RT-PCR检测发现：沙培林刺激使胃癌SGC7901细胞survivin mRNA表达减少，caspase-3 mRNA表达增多，与正常对照组相比有显著差异（P<0.05）。 结论：沙培林在体外可以抑制胃癌SGC7901细胞增殖，改变SGC7901细胞周期分布；使胃癌细胞p53蛋白表达减少，p27kip1表达增加。沙培林诱导胃癌SGC7901细胞发生凋亡，凋亡发生的分子生物学机制可能与survivin mRNA表达下调，caspase-3 mRNA表达上升有关。