大肠癌DNA倍体异常与TGF-β、Smad4伙伴分子的关系

摘要

目的：大肠癌是一种常见的恶性肿瘤，近年来其发病率有逐年上升的趋势。随着肿瘤分子生物学研究的发展，对大肠癌分子水平的认识逐步深入，人们逐渐认识到肿瘤是因为细胞分裂增殖异常所致，同时也是一种细胞周期病，DNA倍体异常可揭示细胞周期的变化，对大肠癌恶变规律作一阐释。对于如何引起细胞周期异常，最近细胞内信号转导已成为普遍关注的生物学问题。细胞内信号转导调节着多细胞生物的生长、发育、分裂及死亡等生物学行为，并且与大肠癌等恶性肿瘤的发生发展密切相关。迄今已发现至少有4条信号转导通路与大肠癌的演进有关，即WNT/Wingless通路，k-ras通路，TGF-β通路以及p53通路。由SMAD介导的TGF-β通路就是其中重要的一条。本研究将对大肠癌DNA倍体异常与TGF-β、Smad4伙伴分子的关系进行深入探讨。 材料与方法：选择2005-2006年在山东省立医院胃肠外科手术切除并经病理证实的69例大肠癌患者，其中男性44例，女性25例；其中≤50岁者27例，>50岁者42例；结肠癌23例，直肠癌46例；Dukes分期A期14例，B期17例，C期31例，D期7例。另取37例正常大肠粘膜标本，作为对照组。采用RT-PCR和FCM的方法，分别测定TGF-βmRNA水平和DNA含量，并对照各临床资料和病理标本应用SPSS11.0 for windows统计软件对成组数值变量进行One-WayANOVA分析，数据用均数士标准差表示；两变量间关系采用直线相关分析。 结果： 1.TGF-β在37例正常大肠粘膜组织中8例表达阳性，阳性率为21.62﹪；69例大肠癌组织中42例表达阳性，阳性率为60.84﹪，两组间差异有显著性意义(x<'2>=14.88，P<0.01)。正常大肠粘膜组织中 TGF-βmRNA的相对灰度值为0.94±0.38；大肠癌组织中TGF-βmRNA的相对灰度值为1.14±0.40，两组间差异也有显著性意义(t=3.2，P<0.05)。37例正常大肠标本中，24例为直肠粘膜的TGF-βmRNA的相对灰度值为0.74±0.23，13例为结肠粘膜TGF-βmRNA的相对灰度值为0.96±0.37两组间差异有显著性意义(t=2.08，P<0.05)。 TβRⅡ在37例正常大肠粘膜组织中27例表达阳性，阳性率为72.97﹪；69例大肠癌组织中28例表达阳性，阳性率为40.59﹪，两组间差异有显著性意义(x<'2>=17.91，P<0.01)。正常大肠粘膜组织中TβRⅡmRNA的相对灰度值为1.07±0.27；大肠癌组织中TβRⅡmRNA的相对灰度值为0.95±0.23，两组间差异也有显著性意义(t=2.29，P<0.05)。 Smad4在37例正常大肠粘膜组织中32例表达阳性，阳性率为86.48﹪；69例大肠癌组织中43例表达阳性，阳性率为62.31﹪，两组间差异有显著性意义(x<'2>=6.80，P<0.05)。正常大肠粘膜组织中Smad4mRNA的相对灰度值为1.10±0.32；大肠癌组织中Smad4mRNA的相对灰度值为0.93±+0.28，两组间差异也有显著性意义(t=2.76，P<0.05)。 2．TGF-β、TβRⅡ、Smad4的表达与大肠癌患者的年龄、性别、部位无关(P>0.05)，Smad4与肿瘤大小、分化程度有关(P<0.05)，TβRⅡ与肿瘤分化程度有关(P<0.05)，TGF-β、TβR Ⅱ、Smad4的表达还与大肠癌组织的浸润深度、淋巴转移与否、Dukes分期有关(P<0.05)。TGF-β在大肠癌组织浸润深度深、有淋巴转移、Dukes分期较晚的患者中阳性表达率高；TβRⅡ在大肠癌组织分化程度高、浸润深度浅、无淋巴转移、Dukes分期较晚的患者中阳性表达率高。Smad4在大肠癌组织分化程度高、肿瘤小于5cm、浸润深度浅、无淋巴转移、Dukes分期较早的患者中阳性表达率高。 3．在69例大肠癌患者中，有16例同时TGF-β、TβRⅡ阳性表达，15例同时TGF-β、TβRⅡ阴性表达，TGF-β．p和TBR Ⅱ无相关性(Mantel-Haenszel x<'2>=0.28，P=0.6)。有27例同时TGF-β、Smad4阳性表达，11例同时TGF-β、Smad4阴性表达，TGF-β和Smad4无相关性(Mantel-Haenszel x<'2>=0.18，P=0.67)。有25例同时TβRⅡ、Smad4阳性表达，23例同时TβRⅡ、Smad4阴性表达，TβRⅡ和Smad4呈正相关(Mantel-Haenszel x<'2>=14.59，P<0.05)。 4．评价细胞增殖程度，我们选用了SPF、PI、DI、G<,0/1>、G<,2>M等指标。DI=倍分析细胞G<,0/1>期细胞峰值荧光道数/正常二倍体G<,0/1>期细胞峰值荧光道数；TGF-β与SPF、PI、DI、G<,0/1>、G<,2>M均无相关性(r<,SPF>=0.207，r<,PI>=0.115，r<,DI>=0.261，r<,G0/1>=0.185，r<,G2M>=0.197；P>0.05)。 TβRⅡ与SPF、PI、DI、G<,0/1>、G<,2>M均无相关性(r<,SPF>=-0.193，r<,PI>=-0.078，r<,DI>=-0.109， r<,G1/1>=-0.211， r<,G2M>=-0.178：P>0.05)。 Smad4与DI无相关性(r<,DI>=-0.216，P>0.05)。与SPF、PI、G<,0/1>、G<,2>M均呈负相关性(r<,SPF>=-0.305，r<,PI>=-0.293，r<,G0/1>=-297，r<,G2M>=-0.320；P<0.05)。 结论： 1．TGF-β在正常大肠粘膜组织中少有表达，在大肠癌组织中有较高表达；TβR Ⅱ、Smad4在正常大肠粘膜中的表达高于大肠癌组织。 2．TGF-β、TβRⅡ、Smad4的表达与大肠癌患者的年龄、性别、部位无关，Smad4与肿瘤大小、分化程度有关，T13RII与肿瘤分化程度有关，TGF-β、TβRⅡ、Smad4的表达还与大肠癌组织的浸润深度、淋巴转移与否、Dukes分期有关。 3．大肠癌组织中TGF-β、TβR Ⅱ、Smad4之间的关系TGF-β和Tβ3RII无相关性，TGF-β和Smad4无相关性，TβRⅡ和Smad4呈正相关。 4．TGF-β与SPF、PI、DI、G<,0/1>、G<,2>M均无相关性；TβRⅡ与SPF、PI、DI、G<,0/1>、G<,2>M均无相关性；Smad4与DI无相关性，与SPF、PI、G<,0/1>、G<,2>M均呈负相关性。 5．TGF-β可作为早期诊断大肠癌的指标之一，通过检测外周血TGF-βmRNA含量，可尽早地诊断大肠癌。

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结 果

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结论

参考文献

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