新疆维吾尔妇女宫颈癌组织中HPV16上游调控区突变及其与宫颈癌发生关系的研究

摘要

宫颈癌是一类严重威胁妇女生命健康的疾病，宫颈癌的发病率和死亡率都很高，并有逐年上升的趋势。高危型人乳头状瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)与宫颈癌发病关系密切，在80-90％的宫颈癌组织中可检测到HPV16和/或HPV18的存在，HPV16和HPV18被认为是妇女宫颈癌的主要病原。 流行病学资料表明，HPV感染率很高；高危型HPV存在变异株，其致癌性有改变。新疆南部维吾尔妇女是宫颈癌的高发区，患病率达459～590/10万。其发病与HPV16感染密切相关，宫颈癌组织中HPV16的检出率达77.6-82.6％。 目前普遍认为病毒癌蛋白E6、E7在病毒诱导癌症形成过程中起着至关重要的作用，而HPV早期基因的表达受HPVURR(upstreamregulatoryregion,URR)调控，许多转录因子可通过与URR结合调控E6、E7基因的表达，URR突变可改变URR的调控功能，影响病毒癌蛋白E6、E7的表达。 为了探讨新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型上游调控区的变异及其与新疆维吾尔族妇女宫颈癌高发之间的关系，从新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织DNA中PCR扩增HPV16URRDNA片段，PCR产物直接测序或克隆后测序，分析维吾尔族妇女宫颈癌组织HPV16URRDNA多态性；然后将URR亚克隆至PGL3-Basic中，转染SiHa和HeLa细胞，48小时后检测荧光素酶活性以评估URR突变造成的转录活性的变化情况。测序结果表明：新疆株URR与原型HPV16URR比较，新疆株HPV16URR核苷酸多处发生变异。随后的荧光素酶活性分析证明，突变的新疆株URR转录活性均比德国标准株URR的高，其中新疆株xju-7URR区位于YY1结合位点的7792(C→T)突变和xju-4URR区位于YY1和E2结合区之间7449(T→C)突变，可显著提高启动子的转录活性。成组t检验表明，新疆南部HPV16URR发生了变异，HPV16URR的突变与HPV16的系统发生存在一定关系；新疆株HPV16URR区的部分点突变会造成启动子转录活性的提高，提示新疆维吾尔妇女宫颈癌的高发与HPV16URR区的突变有关。 POU家族成员之一Skn-1a是上皮细胞特异性转录因子，具有分化依赖性表达和该基因的表达与上皮细胞分化状态相关等特点。研究Skn-1a有助于探讨具有上皮特异性的HPV病毒诱导癌症形成的过程。 利用细胞转染技术探讨Skn-1a对HPV16及HPV18癌基因表达调控的规律。首先，将pcDNA3-Skn-1a质粒通过脂质体转染Hela和SiHa细胞，48小时提取细胞总RNA，反转录cDNA，然后，以β-actin为内标，半定量HPV18E6、HPV16E6、HPV16E7的表达情况。结果显示Skn-1a能够显著激活HPV18E6、HPV16E6、HPV16E7基因的表达。提示HPV16和HPV18的阳性细胞中病毒致癌基因处于活化状态，Skn-1a对p97启动子具有上调作用，为进一步研究Skn-1与宫颈癌发生的关系提供了条件。 同时，检测HPV16E7基因在新疆南部维吾尔妇女宫颈癌组织中的突变情况。从新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌活检组织DNA中PCR扩增HPV16E7全长基因，PCR产物直接测序或克隆后测序。结果表明，27个E7分离片段中仅1个分离株E7基因核苷酸发生2处突变，既647位(在HPV16基因组中的位置)的A→G，氨基酸由Asn变异为Ser(N29S)；845位的T→C，氨基酸不变。E7中N29S的变异在韩国妇女中会提高E7的致癌性，但在新疆南部维吾尔妇女中仅占3.7％(1/27)，故认为E7的突变与新疆南部维吾尔妇女宫颈癌高发关系甚微。 总上所述，新疆南部维吾尔妇女宫颈癌的高发与HPV16URR区的突变以及可与URR结合并调控HPV16早期基因表达的转录因子有关，而与E7的突变关系甚微。

目录

英文缩写

文献综述人乳头瘤病毒上游调控区调控病毒致癌基因表达的研究进展

论文第一部分新疆株人乳头状瘤病毒16型上游调控区DNA多态性及其功能分析

论文第二部分Skn-la转录因子激活HPV E6/E7致癌基因的表达

论文第三部分新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16型E7基因突变分析

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