MiR-17-92簇在HPV阳性宫颈癌患者血清中的表达及其临床意义

摘要

研究背景及目的:
　　宫颈癌是妇女最常见恶性肿瘤之一，其发病率在我国呈逐年上升趋势。人乳头瘤病毒(HPV)感染作为主要病因在宫颈癌的发生过程中发挥关键致癌功能。高风险HPV感染会导致细胞癌基因或抑癌基因作用的miRNAs表达失调。miR-17-92簇（也被称为oncomiR-1）是一个具有癌基因活性且高度保守的著名基因簇，编码6个成熟的miRNA成员分子，即miR-17、miR-18a、miR-19a、miR-19b、miR-20a和miR-92a。在HPV阳性的宫颈癌细胞中，miR-17-92簇作为促癌基因发挥功能。目前，miR-17-92簇在宫颈癌患者中的血清学价值尚不明确。在本研究中，我们旨在检测miR-17-92簇在HPV阳性宫颈癌患者血清中的表达水平，并分析其临床意义。
　　研究方法:
　　1.收集HPV阳性宫颈癌患者血清50例为实验组，HPV阳性子宫良性病变或HPV单纯阳性血清50例作为对照组，采用荧光实时定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-17-92簇6个成员分子(miR-17、miR-18a、miR-19a、miR-19b、miR-20a、miR-92a)的表达，通过Mann-Whitney U检验筛选两组间差异表达的miRNAs;
　　2.收集HPV阳性宫颈癌、CIN及对照血清各100例，采用RT-qPCR方法检测筛选到的差异表达分子的表达，结合液基薄层细胞检测(TCT)结果，及运用受试者工作特征曲线（ROC曲线）评价其在HPV阳性妇女宫颈癌中的诊断价值。
　　3.通过Mann-Whitney U检验和Kruskal-Wallis检验分析差异表达分子与HPV阳性宫颈癌患者临床病理参数间的相关性。
　　结果:
　　1.与对照组相比，miR-18a和miR-92a在HPV阳性宫颈癌患者血清中异常高表达，且其表达水平显著高于CIN组及对照组，在CIN组中的表达水平显著高于对照组（P值均＜0.05）。
　　2.ROC曲线分析结果显示，血清miR-18a诊断宫颈癌的曲线下面积(AUC)为0.810(95％CI:0.749～0.862)，灵敏度为89％(95％CI:81.2～94.4)，特异度为65％(95％CI:54.8～74.3);血清miR-92a诊断宫颈癌的AUC为0.883(95％CI:0.830～0.924)，灵敏度为72％(95％CI:62.1～80.5)，特异度为91％(95％CI:83.6～95.8)。通过logistic回归计算，我们建立了基于血清miR-18a和miR-92a联合检测的宫颈癌血清miRNA panel，其诊断宫颈癌的AUC为0.936(95％CI为0.891～0.966，灵敏度为83.5％(95％CI:74.6～90.3)，特异度为87.8％(95％CI:79.6～93.5)。该miRNA panel诊断宫颈癌的AUC明显高于血清miR-18a和miR-92a（P值均＜0.05）。
　　3.血清miR-18a诊断CIN3+的AUC为0.792(95％CI:0.737～0.840)，灵敏度为87％(95％CI:80.7～91.9)，特异度为65％(95％CI:54.8～74.3);血清miR-92a诊断CIN3+的AUC为0.799(95％CI:0.744～0.847)，灵敏度为55.8％(95％CI:47.6～63.8)，特异度为92％(95％CI:84.8～96.5)。已建立的血清miRNA panel诊断CIN3+的AUC为0.885(95％CI:0.838～0.921，灵敏度为70.2％(95％CI:62.2～77.4)，特异度为89.8％(95％CI:80.0～95.0); TCT诊断CIN3+的AUC为0.645(95％CI:0.582～0.704)，灵敏度为51.9％(95％CI:43.8～60.1)，特异度为77.0％(95％CI:67.5～84.8)。该血清miRNA panel诊断CIN3+的AUC明显高于传统TCT及单独血清miR-18a或miR-92a检测（P值均＜0.05）。
　　4.Mann-Whitney U检验和Kruskal-Wallis检验分析结果显示，血清miR-18a的表达水平与HPV阳性宫颈癌患者肿瘤大小显著相关（P值均＜0.05），血清miR-92a的表达与患者局部淋巴结转移及FIGO分期显著相关（P＜0.05），二者均与年龄、肿瘤类别及分化程度等其他临床病理参数均无显著相关性(P＞0.05)。
　　结论:
　　1.miR-17-92簇成员分子miR-18a和miR-92a在HPV阳性宫颈癌及CIN患者血清中异常高表达。单独或联合检测血清miR-18a和miR-92a在诊断HPV阳性宫颈癌及鉴别高级别CIN中的诊断效能均优于TCT检查，二者联合检测更有助于宫颈癌早期诊断，提示其可作为高危型HPV阳性妇女宫颈癌筛查的潜在分检标志物。
　　2.miR-18a和miR-92a在HPV阳性宫颈癌患者血清中表达，分别与患者肿瘤大小及局部淋巴结转移、FIGO分期显著相关，提示二者在宫颈癌的发生发展中发挥重要功能。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

2．微小RNA(miRNAs)与癌症

3．miRNAs与HPV相关肿瘤

4．循环miRNAs与肿瘤诊断

5．循环miRNAs与宫颈癌

实验材料与方法

1．试验设计

2．临床受试者资料

3．标本采集

4．主要仪器

5．主要试剂

6．主要试剂配制

7．实验方法

8 数据处理与统计学分析

结果

1．U6作为内参基因在受试者血清中表达稳定

4．评估血清miR-18a、miR-92a及二者联合检测对宫颈癌的诊断效能

5．评估血清miR-18a、miR-92a及二者联合检测CIN3+的诊断价值

6．HPV阳性宫颈癌患者血清miR-18a和miR-92a表达水平与临床病理参数间的关系

讨论

结论

附图表

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的论文