人肝外胆管癌神经浸润与转移的初步研究

摘要

胆管癌是消化系统重要的恶性肿瘤。其恶性度高、诊治困难、预后不良，严重威胁人类的健康。目前认为，根治性手术切除是胆管癌惟一有效的治疗手段。尽管近年来诊疗技术有了较快发展，但其5年存活率仍然只有5％左右，主要原因是术后极易复发。 浸润和转移是恶性肿瘤重要的生物学特性，也是肿瘤重要的预后因素之一。传统认为，恶性肿瘤的转移途径主要有四种：局部浸润、血道转移、淋巴转移和腹腔广泛种植。 本研究旨在前期研究结果的基础上，对胆管癌的神经浸润和转移的生物学特性进行初步的研究和探索，着重探讨神经生长因子在此过程中的作用，以期能够为临床治疗研究提供备选分子靶点，并对这一较为特殊的现象有所认识和总结。 第一部分：神经生长因子与胆管癌临床病理特征的相关性分析 论文1：胆管癌神经浸润的临床病理分析 目的:总结分析胆管癌神经浸润的临床病理特点，与腹痛或背痛、淋巴转移、病理类型以及肿瘤分期的关系。 结论 1.神经浸润与胆管癌的病理低分化、淋巴转移以及TNM分期密切相关，是胆管癌的重要病理特征之一，可能有助于判断胆管癌的预后。 2.神经浸润是胆管癌发生中的早期事件，提示胆管癌是一种高恶性、高浸润性生长的肿瘤。 3.疼痛产生的原因是多方面的，神经浸润可能是其中重要原因之一，单纯靠疼痛这一单一因素，不能判断有否神经浸润。 论文2：神经生长因子与人胆管癌神经浸润的相关性研究 目的:探讨神经生长因子及其酪氨酸激酶受体A与人胆管癌神经浸润、淋巴转移、病理类型以及肿瘤分期的关系。 结论 1.NGF与胆管癌神经浸润密切相关，也与肿瘤的TNM分期密切相关。检测胆管癌组织NGF的表达情况，可能有助于判断预后。 2.NGF可能通过旁分泌途径与TrkA作用促使癌细胞延神经转移；通过自分泌途径促进胆管癌细胞增殖。 第二部分：稳定表达神经生长因子的胆管癌细胞的建立与培养 论文3.神经生长因子真核表达载体的构建及鉴定 目的:构建人β-NGF真核表达载体并鉴定，为转染胆管癌细胞奠定实验基础。 结论:成功构建β-NGF真核表达载体pcDNA3.0-NGF，可用于后续试验。为研究NGF在胆管癌细胞中的作用奠定试验基础。 论文4.pcDNA3.0-NGF转染人胆管癌细胞及其鉴定 目的:进一步检测pcDNA3.0-NGF质粒的构建结果；建立能稳定表达NGF蛋白的人胆管癌QBC939细胞。 结论 1.转染pcDNA3.0-NGF后确能增强β-NGF在胆管癌细胞QBC939中的表达，进一步证实此前的质粒构建工作是成功的。 2.成功建立能够高表达NGF的胆管癌细胞，为研究NGF在胆管癌细胞中的作用奠定试验基础。 第三部分：神经生长因子对人胆管癌细胞体外增殖活性和侵袭力的影响 论文5：神经生长因子对人胆管癌细胞体外增殖活性和侵袭力的影响 目的:探讨胆管癌细胞源性神经生长因子对人胆管癌细胞系QBC939体外增殖活性和侵袭力的影响。 结论:胆管癌细胞源性的β-NGF具有促进胆管癌细胞系QBC939体外增殖活性和侵袭力的作用。 第四部分：神经生长因子对人胆管癌细胞裸鼠体内成瘤及转移能力影响的研究 论文6：神经生长因子对人胆管癌细胞体内成瘤及转移能力的影响 目的:探讨胆管癌细胞源性神经生长因子对人胆管癌细胞系QBC939体内成瘤及转移能力的影响。 结论 1.胆管癌细胞源性神经生长因子具有增强胆管癌细胞成瘤能力的作用。 2.高表达神经生长因子的胆管癌细胞成瘤速度快，易发生远处转移，与肿瘤预后密切相关。 小结 本研究首先通过对临床病例和病理标本的检测分析，探讨NGF与胆管癌临床病理特征之间的关系，进而通过体内、体外实验研究NGF在胆管癌发展中的作用。通过以上研究结果的分析，得出以下结论： 1.38％(35/92)的肝外胆管癌可出现神经浸润，且神经浸润与肿瘤的淋巴转移、低分化水平以及TNM分期紧密相关，是影响肿瘤预后的重要因素。 2.神经生长因子高表达于胆管癌组织，其表达强度与胆管癌的神经浸润、低分化水平、淋巴转移以及TNM分期密切相关，提示NGF可能是参与胆管癌神经浸润和恶性进展的重要细胞因子。由于NGF的高亲和力受体TrkA亦表达于胆管癌细胞膜，从而提示，胆管癌细胞可能通过自分泌途径促进自身的增殖与侵袭。 3.转染β-NGF基因后的胆管癌细胞，其增殖活性和侵袭力显著增强，且与胆管癌细胞β-NGF的表达量正相关，呈量-效依赖关系。 4.肿瘤细胞源性β-NGF能够显著缩短胆管癌细胞在裸鼠体内的成瘤时间，提高其成瘤速度，增强胆管癌的生长及远处转移能力。 5.由于目前尚无判断胆管癌预后的有效临床检测指标，NGF的检测可能有助于判断胆管癌的预后。 本研究所做工作具有如下创新性： 1.通过对92例胆管癌病人的临床资料和病理学分析，明确阐述了神经生长因子与人肝外胆管癌病理特征之间的关系：神经生长因子与胆管癌的神经浸润、细胞低分化、淋巴转移以及TNM分期密切相关。 2.神经浸润是胆管癌发展中的早期事件，高度浸润性生长和早期转移是胆管癌重要的生物学特征。 3.证实神经生长因子能够促进人胆管癌细胞的增殖活性、侵袭力和成瘤能力，进而促进胆管癌的浸润和转移。 4.由于NGF可能是调控多种肿瘤侵袭与转移的上游因子，本研究为胆管癌神经浸润的治疗研究提供了可供备选的分子靶点。

目录

研究背景

第一部分：神经生长因子与胆管癌临床病理特征的相关性分析

第二部分：稳定表达神经生长因子的胆管癌细胞的建立与培养

第三部分：神经生长因子对人胆管癌细胞体外增殖活性和侵袭力的影响

第四部分：神经生长因子对人胆管癌细胞成瘤及转移能力的影响

综述一胆道胰腺恶性肿瘤神经浸润和转移的研究现状

综述二肝门部胆管癌的现代诊疗

综述三腹腔室隔综合征

发表论文目录

致谢

附：92例胆管癌病例记录