穿心莲内酯对铜绿假单胞菌Quorum Sensing系统调控毒力因子产生及MexAB-OprM外排泵mRNA表达水平研究

摘要

第一部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌QS调控毒力因子表达的影响 目的：鉴于铜绿假单胞菌的密度阈值感应系统(quorumsensingsystem，QS系统)在细菌致病性和耐药性中发挥重要作用，拟观察穿心莲内酯对铜绿假单胞菌QS系统调控的毒力因子表达的影响，以初步探讨穿心莲内酯抗感染机制。 方法：选取铜绿假单胞菌野生株和QS信号双突变株PAO-JP2，穿心莲内酯主要成分为亚硫酸氢钠穿心莲内酯。两种菌株各分两组：穿心莲内酯组和对照组。穿心莲内酯组穿心莲内酯浓度为12.5mg/mL，对照组为空白。对PAO1菌株测定穿心莲内酯组和对照组生长曲线变化，两种菌株分别测定穿心莲内酯组和对照组以下内容：(1)绿脓菌素(pyocyanin)；(2)胞外蛋白水解酶(proteolyticactivity)(3)弹性蛋白酶活性(elastaseactivity)。 结果：穿心莲内酯对铜绿假单胞菌未表现出生长抑制作用。(1)穿心莲内酯组绿脓菌素分泌较对照组受到明显抑制(P＜0.05)，而PAO-JP2株两组则无明显差别。(2)蛋白水解酶穿心莲内酯组活性与对照组存在明显差异(P＜0.05)，而PAO-JP2株两组则无明显差别。(3)弹性蛋白酶穿心莲内酯组铜绿假单胞菌所产活性较对照组显著降低(P＜0.05)，而这种差异在PAO-JP2株中无显著意义。 结论：穿心莲内酯可能通过抑制铜绿假单胞菌毒力因子产生而实现抗感染作用。 第二部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵mRNA表达水平影响 目的：建立实时荧光定量PCR法检测铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵mRNA水平表达方法，探讨中草药穿心莲内酯对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵mRNA水平表达情况的影响。 方法：克隆铜绿假单胞菌mexAB-oprM操纵元中mexB基因和30SrRNA基因rpsL，分别插入pMD18-T载体，构建相应质粒pEM6和pER8作为实时荧光定量PCR检测mexB基因和rpsL基因mRNA水平表达的DNA标准品。以不同浓度穿心莲内酯分别加入铜绿假单胞菌PAO1株培养基，经12h培养后，提取细菌mRNA，经逆转录合成cDNA，采用实时荧光定量PCR法检测cDNA拷贝数以计算PAO1菌中的mexB基因和rpsL基因mRNA表达水平。 结果：成功构建标准曲线质粒pEM6和pER8，穿心莲内酯组(50μg/ml，100μg/ml，150μg/ml，200μg/ml)与对照组mexB基因mRNA表达水平有明显减少(P＜0.05)，穿心莲内酯组间差异不明显(P＞0.05)。 结论：穿心莲内酯可在mRNA水平抑制外排泵MexAB-OprM的表达，其可能是其提高抗生素敏感性机制之一。

目录

第一部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌QS调控毒力因子表达的影响 摘要

第一部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌QS调控毒力因子表达的影响 英文摘要

第一部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌QS调控毒力因子表达的影响 引言

第一部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌QS调控毒力因子表达的影响 材料与方法

第一部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌QS调控毒力因子表达的影响 结果

第一部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌QS调控毒力因子表达的影响 讨论

第一部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌QS调控毒力因子表达的影响 小结

第一部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌QS调控毒力因子表达的影响 [ 参考文献]

第二部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵mRNA表达水平影响 摘要

第二部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵mRNA表达水平影响 英文摘要

第二部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵mRNA表达水平影响引言

第二部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵mRNA表达水平影响 材料和方法

第二部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵mRNA表达水平影响 结果

第二部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵mRNA表达水平影响 讨论

第二部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵mRNA表达水平影响 小结

第二部分穿心莲内酯对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵mRNA表达水平影响 [参考文献]

综述 铜绿假单细胞菌密度感应系统与感染

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