miR-16-1抑制A549细胞株生物学行为及非小细胞肺癌ARID1A基因表达的研究

摘要

本文主要从以下几个部分展开论述：
　　第一部分 miR-16-1抑制A549细胞株生物学行为的研究
　　目的:研究非小细胞肺癌 miR-16-1的表达以及miRNA-16-1抑制A549细胞株生物学行为,为进一步研究非小细胞肺癌与 miR-16-1的相互关系提供依据。
　　方法:以 A549肺癌细胞株和40例非小细胞肺癌病例为研究对象,应用qRT-PCR检测方法,比较肺癌组织和癌旁正常肺组织中miR-16-1的表达,研究非小细胞肺癌与miR-16-1表达的关系;通过 lipofectamine2000转染在细胞体内有生物活性的has-miR-16-1 mimics,应用qRT-PCR检测转染前后 miR-16-1的表达情况;应用MTT、AnnexinV/FITC-PI流式细胞术、Transwell等方法检测转染 miR-16-1 mimics前后 A549细胞株的增殖、凋亡和侵袭性变化,研究 miR-16-1对 A549肺癌细胞株的生物学行为的影响。
　　结果:40例肺癌组织和癌旁正常肺组织 miR-16-1表达的比较结果显示,肺癌组织中miR-16-1的表达明显低于癌旁正常肺组织 miR-16-1的表达,与癌旁正常肺组织比较,肺癌组织中miR-16-1的表达值平均只有癌旁正常肺组织的0.34倍,差异有统计学意义,p<0.05;A549转染 hsa-miR-16-1 mimics后,细胞周期检测结果显示细胞阻滞在 G0-G1期,细胞的凋亡明显增加,A549细胞侵袭性明显降低,并且 A549细胞的增殖活性降低。
　　结论:miR-16-1有抑制A549肺癌细胞株生长、增殖和侵袭的作用,增加 miR-16-1的表达可抑制肿瘤的进展,miR-16-1可能是治疗肺癌的一个潜在靶点。
　　第二部分 非小细胞肺癌 ARID1A基因表达的研究
　　目的:研究 ARID1A在非小细胞肺癌以及A549细胞株中的表达,探讨 ARID1A基因在非小细胞肺癌中的作用机制。
　　方法:以 A549肺癌细胞株和40例非小细胞肺癌病例为研究对象,应用免疫荧光和激光共聚焦技术检测肺癌细胞株 A549中ARID1A的表达和定位情况;以 qRT-PCR技术检测非小细胞肺癌中ARID1A的mRNA表达;通过 western blotting和免疫组化技术检测 ARID1A的蛋白表达,探讨非小细胞肺癌中ARID1A的表达与临床病理特点之间的关系,从而阐明在非小细胞肺癌中ARID1A基因表达的临床意义。
　　结果:本组实验通过免疫荧光及共聚焦显微镜检测,结果发现 ARID1A蛋白定位在细胞核,定位特异性高,在 A549肺癌细胞株中存在 ARID1A阳性表达。在40例非小细胞肺癌标本中,qRT-PCR检测结果显示 ARID1A的mRNA表达下降,与癌旁正常肺组织的比较,平均值为癌旁正常肺组织的0.63,p<0.05,两者差异有统计学意义。western blotting检查和免疫组化的结果发现 ARID1A肺癌组织中存在表达缺失,通过对肺癌组织和癌旁正常肺组织的比较,肺癌组织 ARID1A的蛋白表达低于癌旁正常肺组织。ARID1A阳性表达发生在非小细胞肺癌的早期阶段,局限于Ⅰ、Ⅱ期,在有远处转移的组织中没有发现阳性表达;ARID1A阳性表达与性别、组织学类型和有无淋巴结转移无关。
　　结论:非小细胞肺癌中ARID1A基因表达降低,其表达缺失与肺癌进展有关,其作为抑癌基因在肺癌的早期阶段发挥作用。

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第一部分 miR-16-1抑制A549细胞株生物学行为的研究

1 前言

2 材料和方法

3 结果

4 讨论

5总结

参考文献

第二部分 非小细胞肺癌ARID1A基因表达的研究

1 前言

2 材料和方法

3 结果

4 讨论

5 总结

参考文献

综述

1. miRNA介绍

2 miRNA的检测

3 miRNA的作用机制

4 miRNA与肺癌的发生

5. miRNA与肺癌的诊断

6. miRNA与肺癌的预后

7 miRNA与放化疗反应

8 miRNA的治疗前景

结 论

参考文献

附录一

附录二

致谢