梅毒血清固定患者外周血Th22细胞及IL-22的表达

摘要

目的:梅毒（syphilis）一种常见的、慢性的、经典的性传播疾病,并能对全身组织都能造成不可逆的损伤，是我国目前发病率最高的性传播疾病之一。近些年来，我国梅毒的发病率呈现逐步上升的势态，对于梅毒的诊治受到关注。通常梅毒患者在经过正规的驱梅治疗后，患者临床症状消失，梅毒血清学试验中非梅毒螺旋体血清实验（如RPR、USR等）可在3-6个月内转为阴性。而在临床中我们发现有部分患者在经过正规驱梅治疗后虽然临床症状消失，但是在随访过程中非梅毒螺旋体血清学试验在很长时间内仍然为阳性，未能转阴，即表现为血清固定(Serofast)。这种现象已成为在临床驱梅治疗中面临挑战之一，也同时会对患者心理产生巨大负担。梅毒血清固定的机制目前尚未完全清楚，梅毒血清固定的发生目前多认为与细胞免疫存在联系，而Th22细胞及其主要的效应分子IL-22已被证明在识别和攻击入侵机体的病毒和病原体或针对炎症反应做好自我保护方面起着特殊的作用。关于Th22及IL-22在梅毒血清固定发生机制中的研究国内外未见报道。本课题通过对梅毒血清固定患者及梅毒血清转阴患者的外周血中Th22细胞及血清IL-22水平的表达的分析，为梅毒血清固定发生机制的研究提供一个新的视角，也将能为更好处理梅毒血清固定现象提供新的思路。
　　方法：收集2013年12月-2014年12月期间就诊于华中科技大学同济医学院附属协和医院皮肤科门诊的患者，30例确诊为梅毒血清固定患者为病例组及30例经正规治疗后非梅毒螺旋体血清学试验转阴的患者为对照组，分别进行静脉采血，我院在梅毒治疗后对非梅毒螺旋体血清学检查指标为RPR,转阴与否也是用此指标来衡量。入组标准：1.梅毒血清固定确诊患者；2.就诊时HIV抗体试验阴性；3.已经过正规的驱梅治疗；4.随访期间未发生不洁性行为；5.随访期间未出现再感染或复发；6.随访期间无梅毒临床表现；7.RPR持续阳性早期梅毒6个月，晚期梅毒12个月以上；8.脑脊液VDRL、FAT-Ab、TPPA均为阴性。排除标准：1.随访期间出现梅毒临床表现；2.近两月内使用糖皮质激素及免疫抑制剂；3.伴有可致生物学假阳性的急性或慢性疾病；4.脑脊液检查异常；5.有内脏梅毒感染。病例组30例，其中男性13例，女性17例，年龄在18-60岁，平均年龄35.3±12.22岁，对照组30例，其中男性18例，女性12例，年龄在20-58岁，平均年龄30±8.74为岁。经t检验，对照组的年龄、性别与病例组之间无明显差异。外周血中Th22细胞的检测方法：采集病例组及对照组患者的肘静脉血各4ml放入肝素钠抗凝管中，分离得到外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC），然后再向其中先后加入莫能霉素（Monenosinsolution）、佛波醇-12-肉寇酯-13-乙醇（Phorbol-12-myristate-13-acetate PMA）、离子霉素（Ionomycin）置于37℃，5％二氧化碳孵育箱中刺激培养5小时，然后进行细胞表面染色、固定、透化破膜及胞内细胞因子染色，最后通过流式细胞仪测定Th22细胞所占淋巴细胞的百分比。血清中IL-22的检测方法：采集病例组及对照组患者的肘静脉血各3ml放入EDTA抗凝管中，离心后将收集血清标本置于-80℃的冰箱中保存。采用双抗体夹心ELISA法检测所收集到的血清标本中IL-22的表达水平。最后应用SPSS17.0软件进行统计学分析，对病例组及对照组的两种数据进行t检验，分析外周血中Th22细胞及血清中的IL-22的表达水平在病例组及对照组之间是否存在统计学差异。检验水准取P<0.05有意义。
　　结果：
　　1、流式细胞学检测结果(%):外周血中Th22细胞表达比例在病例组(3.56±0.22)与对照组(3.40±0.20)之间无统计学意义(t=1.712 P=0.104P＞0.05)；
　　2、双抗体夹心ELISA方法检测结果(pg/ml):血清中IL-22的表达在病例组(11.77±1.88)与对照组(14.41±1.28)之间存在统计学意义(t=-3.659 P=0.002 P＜0.01)。
　　结论:
　　1、外周血中Th22细胞表达可能与梅毒血清固定的发生无直接相关性；或者说发生梅毒血清固定的患者外周血中Th22细胞可能为活化的效应性T细胞，能向外分泌各种效应性细胞因子而在疾病的发生与发展中发挥作用，而对照组外周血中存在是无功能性的Th22细胞，既未被激活的Th22细胞。故Th22细胞在外周血百分比在血清固定患者组与非梅毒螺旋体血清学试验转阴患者组之间无差异；
　　2、梅毒血清固定患者病例组血清中IL-22的表达量低于非梅毒螺旋体血清学试验转阴的对照组。提示IL-22的表达量可能与梅毒血清固定相关。它可能不仅参与梅毒的发病，在机体对梅毒螺旋体的清除过程中也具有重要作用。IL-22水平的低表达，间接反映了分泌IL-22的Th22细胞、Th17细胞及NK细胞的数量或功能受到抑制，这个与Th1/Th2细胞免疫反应功能的失衡，机体细胞免疫功能受到抑制的观点是一致的。

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英文缩略语表

实验试剂及仪器

中文摘要

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前言

方法

1.1：标本收集

1.2：方法

实验结果

2.1 外周血中Th22细胞所占淋巴细胞的百分比的测定结果

2.2 血清中IL-22的表达水平的测定结果

讨论

参考文献

综述: IL-22及Th22细胞与梅毒的研究进展

致谢