脑缺血后新生神经元的迁移及其树突生长研究

摘要

目的：正常成年鼠脑内SVZ区和DG区不断产生神经干细胞，新生神经干细胞能够增殖、迁移、分化发育并整合进入已有的神经环路，这一过程对于维持生命体的正常生理活动有重要的意义。我们重点研究在脑缺血再灌后，SVZ和 DG区的神经发生。我们以前的研究已经表明，脑缺血再灌后，新生的神经干细胞会向缺血区迁移，但是脑缺血再灌后缺血区的这些神经干细胞是否来源 SVZ区，DG区的神经发生是否和正常鼠脑内一致还需要进一步研究，本文将重点研究在脑缺血再灌这一病理状态下，SVZ区神经干细胞的迁移情况以及 DG区新生神经干细胞的发育情况。
　　方法：利用脂质体将pMT44逆转录病毒载体导入GP2-293中构建出一定滴度的逆转录病毒。这种逆转录病毒只能够侵染增殖分化的细胞，且能稳定表达红色荧光蛋白，利用逆转录病毒的这种特性，我们可以选择性的标记出SVZ区的神经干细胞。线栓法制作大鼠脑缺血模型，再灌3d后，侧脑室注射病毒，以标记增殖细胞.分注射病毒后3d、7d、14d后，灌流取材切片，并用免疫荧光染色法加强标记，在免疫荧光显微镜下观察结果。同样的方法我们海马注射病毒可以标记出海马的新生神经干细胞，给予reelin抑制剂后采用免疫荧光法观察海马区神经干细胞的发育情况，采用水迷宫从行为学上检测大鼠的记忆力。
　　结果：⑴采用转染后浓缩上清的方法可以得到1×107的病毒上清；⑵脑缺血再灌后，注射病毒后的3d、7d、14d，侧脑室角的mcherry（+）细胞数目和迁移距离显著增加；⑶脑缺血再灌后17d，给予reelin抑制剂RAP组和单纯缺血组相比，树突长度以及顶树突数量显著下降；⑷脑缺血再灌后17d，给予reelin抑制剂RAP组和单纯缺血组相比，大鼠在水迷宫试验中寻找平台的潜伏期从第五天开始显著增加。
　　结论：①成年鼠脑缺血再灌后，SVZ区产生增殖的神经干细胞，这些神经干细胞会向缺血区发生迁移。②脑缺血再灌后，reelin参与成年脑脑缺血再灌后DG区神经干细胞的发育。

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前言

材料与方法

1. 实验材料与仪器

2． 实验方法

结果

1. 实验过程和逆转录病毒活性检测

2.逆转录病毒标记示踪MCAO后神经干细胞的迁移情况

3.受体相关蛋白RAP对MCAO后DG区的新增殖的细胞的发育的影响

4.受体相关蛋白RAP能够降低了MCAO后大鼠的记忆能力

讨论

1. 逆转录病毒的相关特性

2. 神经干细胞迁移

3. 神经干细胞标记物

3.Reelin参与了DG区神经干细胞的发育

结论

参考文献

综述：成年大鼠SVZ区神经发生研究进展

致谢