孕激素及脂寡糖在淋球菌致病中的机制研究

摘要

目的：
　　研究孕激素对淋球菌诱导的NLRP3炎症蛋白复合体的调控
　　方法：
　　构建去卵巢化与正常BALB/c雌性小鼠淋球菌感染模型，将20只BALB/c小鼠随机分为4组：
　　1.假手术+淋球菌接种组(intact)；
　　2.卵巢摘除+淋球菌接种组；
　　3.卵巢摘除+孕激素（1mg/d）+淋球菌接种组；
　　4.假手术+生理盐水接种组（control）。分别记录4组模型小鼠感染天数并检测接种后每日阴道排出的菌量、阴道内中性粒细胞数量，ELISA法检测接种后小鼠阴道内IL-1β、TNF-α及IL-6细胞因子表达水平，接种后第5日取小鼠阴道及宫颈组织，HE染色检测阴道及宫颈组织病理改变，免疫荧光法检测阴道组织NLRP3和caspase-1 p20水平。
　　体外实验分为5组：
　　1.THP-1细胞组（空白对照）；
　　2.THP-1细胞+淋球菌组；
　　3.THP-1细胞+淋球菌+10 ng/mL孕激素组；
　　4.THP-1细胞+淋球菌+100 ng/mL孕激素组；
　　5.THP-1细胞+淋球菌+1000 ng/mL孕激素组。ELISA法检测孕激素作用后淋球菌感染的THP-1细胞分泌IL-1β水平，western-blot法检测细胞内NLRP3及caspase-1水平，RT-PCR法检测细胞内IL-1β及NF-κB的mRNA水平，western-blot检测细胞核内NF-κB p65核转位，荧光探针法检测细胞内ROS含量。
　　结果：
　　1）体内实验：孕激素降低小鼠模型的淋球菌感染菌量，抑制感染淋球菌小鼠阴道及宫颈组织内炎症细胞浸润，降低IL-1β、TNF-α、IL-6等炎性因子及NLRP3、caspase-1 p20的表达；
　　2）体外实验：孕激素抑制淋球菌诱导的THP-1细胞内NLRP3、caspase-1及NF-κB的活化，减少了细胞的IL-1β分泌及ROS的释放。
　　结论:
　　孕激素通过减少NF-κB的转录及ROS的产生抑制淋球菌诱导的NLRP3炎症体活化，从而减轻感染淋球菌小鼠生殖道中炎症细胞浸润，减少炎症因子的表达。该研究从另一个角度阐述女性淋病无症状感染机制，为淋病防治提供了新的策略。
　　目的：
　　研究淋球菌表面的脂寡糖LOS中的可变糖链结构（α寡糖链）对淋球菌表面Opa蛋白与中性粒细胞表面的癌胚抗原相关细胞黏附分子3的结合能力的影响。
　　方法：
　　本试验通过同源重组法将lgtA'CDΔ(CD),lgtABCDΔ(Δ5),lgtABCDEΔ(Δ4),和lgtFΔ(lgtF)的质粒转染进入野生株MS11 varC得到4种MS11 LOS突变株。研究5种长度不同的α寡糖链淋球菌突变株对中性粒细胞的呼吸爆发的影响，对HeLa-CEACAM3细胞的粘附及侵袭能力的影响；在荧光显微镜下观察孵育5（6）-CFDA/SE分子探针的细菌被HeLa-CEACAM3细胞黏附及吞噬的情况。正常人类血清杀伤实验评估5种α寡糖链淋球菌突变株对补体的结合能力，糜蛋白酶消化实验评估淋球菌表面Opa蛋白结构可能发生的改变。
　　结果：
　　LOS中的α寡糖链影响淋球菌Opa与CEACAM3结合能力，表达OpaI的α寡糖链完全缺失的淋球菌突变株（lgtF突变株）丧失与中性粒细胞及HeLa-CEACAM3细胞表面的CEACAM3结合能力及刺激中性粒细胞化学发光反应的能力。荧光显微镜观察HeLa-CEACAM3细胞内OpaI淋球菌野生株的绿色荧光的强度明显高于OpaI淋球菌lgtF突变株，表明OpaI淋球菌野生株比OpaI淋球菌lgtF突变株对HeLa-CEACAM3细胞侵袭能力强。血清杀伤实验表明除OpaI LOS野生株，lgtA'CDΔ(CD)突变株和lgtF突变株仍然保持血清敏感性，而Δ5和Δ4突变株则表现出血清抵抗性。糜蛋白酶法鉴定lgtF突变株Opa蛋白结构，结果显示Opa蛋白的功能丧失是由于Opa的特定部位丢失或结构变化。
　　结论：
　　淋球菌LOS中的α寡糖链通过减弱奈瑟淋球菌非透明蛋白与中性粒细胞表面的癌胚抗原相关细胞黏附分子3的结合能力参与淋病发病机制。

目录

封面

声明

目录

第一篇

英汉缩略语名词对照表

中文摘要

英文摘要

前言

实验材料

第一部分：孕激素诱导的小鼠淋球菌无症状感染模型的构建

材料与方法

二、结 果

三、讨论

第二部分：NLRP3及caspase-1 p20在孕激素诱导的小鼠淋球菌无症状感染模型中的表达

一 、材料与方法

二 、结 果

三 、讨 论

第三部分 孕激素抑制淋球菌诱导的 NLRP3 炎症蛋白复合体在THP-1细胞中的活化

一 、材料与方法

二 、结 果

三 、讨 论

参考文献

第二篇

英汉缩略语名词对照表

中文摘要

英文摘要

前言

一、材料与方法

结果

讨论

参考文献

致谢

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