低表达Semaphorin6C通过激活PI3K/AKT信号通路减少颗粒细胞和卵母细胞间连接从而加速卵泡的闭锁

摘要

目的:卵泡发育过程中Semaphorin6C的表达随着年龄的增加呈降低趋势，提示Semaphorin6C在卵巢衰老过程中扮演重要角色，且衰老卵巢中卵泡闭锁率显著增加，因完整的细胞连接是卵泡发育的必备前提，为进一步探索细胞连接是否参与卵泡闭锁的发生及其发生机制，通过下调Sema6C表达检测其在卵泡闭锁中细胞连接的改变并对其机制进行研究。
　　方法:选取14天C57小鼠30只为研究对象，体式显微镜下针刺分离窦前卵泡3D方法培养，以保持卵泡形态。分别予以Sema6C-SiRNA和无意义Negative-SiRNA对窦前卵泡进行处理，培养72小时，光学显微镜下观察各组卵泡生长状况和闭锁率；采用电子显微镜和荧光黄显微注射技术形态学上观察卵泡中颗粒细胞和卵母细胞间细胞连接改变；运用Real-time PCR技术比较各组卵泡细胞连接分子Connexin37、β-catenin的mRNA表达情况；Western blot技术检测各组卵泡Sema6C、PI3K/AKT、Connexin37、β-catenin、Bax、Bcl-2分子蛋白水平表达情况；TUNEL检测各组卵泡颗粒细胞凋亡情况。
　　结果:Si-Sema6C干预窦前卵泡后，发现卵泡生长发育受限，闭锁增加，而对照组卵泡生长发育完好，闭锁相对降低；进而电镜和荧光黄微注射结果显示干预组颗粒细胞和卵母细胞间细胞连接较对照组形态学显示微绒毛倒伏，突触减少，且在mRNA和蛋白水平上，干预组相关细胞连接分子Connexin37、β-catenin表达明显低于对照组。下调Sema6c表达活化PI3K/AKT信号通路从而调控细胞连接。PI3K/AKT信号通路被抑制后能部分逆转低Sema6C对卵泡的生长受限、细胞连接减少及闭锁的影响。
　　结论:低表达Semaphorin6C通过激活PI3K/AKT信号通路减少颗粒细胞和卵母细胞间连接从而加速卵泡闭锁。

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第一部分： 低表达Semaphorin6C通过激活PI3K/AKT信号通路减少颗粒细胞和卵母细胞间连接从而加速卵泡闭锁

中文摘要

ABSTRACT

前言

材料与方法

1. 实验材料

2. 实验方法

3. 统计学处理：

实验结果

1. 下调Sema6C表达使卵泡生长受限、促进卵泡闭锁

2. 下调Sema6C降低窦前卵泡内颗粒细胞与卵母细胞间细胞连接分子Cx37、β-catenin的表达

3. 下调Sema6C表达活化P-AKT/AKT表达

4. 低浓度PI3K抑制剂LY294002拮抗下调Sema6C后对卵泡生长限制和促闭锁的作用

5. 低浓度PI3K抑制剂LY294002逆转了下调Sema6c后对卵泡细胞连接关闭及促凋亡的作用

讨论

参考文献

第二部分：综述： Semaphorin、细胞连接在卵泡发育中的作用

致谢